鸡ANXA2基因在卵泡发育中的表达及调控研究-生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 曲阜师范大学研究生学位论文原创性说明 （根据学位论文类型相应地在“□”划“√”） 本人郑重声明：此处所提交的博士□/硕士□论文《鸡 ANXA2 基因在卵 泡发育中的表达及调控研究》，是本人在导师指导下，在曲阜师范大学攻读 博士□/硕士□学位期间独立进行研究工作所取得的成果。论文中除注明部分 外不包含他人已经发表或撰写的研究成果。对本文的研究工作做出重要贡献 的个人和集体，均已在文中已明确的方式注明。本声明的法律结果将完全由 本人承担。 作者签名： 日期： 曲阜师范大学研究生学位论文使用授权书 （根据学位论文类型相应地在“□”划“√”） 《鸡 ANXA2 基因在卵泡发育中的表达及调控研究》系本人在曲阜师范大 学攻读博士□/硕士□学位期间，在导师指导下完成的博士□/硕士□学位论 文。本论文的研究成果归曲阜师范大学和山东农业大学所有，本论文的研究 内容不得以其他单位的名义发表。本人完全了解曲阜师范大学关于保存、使 用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门送交论文的复印件和电子版 本，允许论文被查阅和借阅。本人授权曲阜师范大学，可以采用影印或其他 复制手段保存论文，可以公开发表论文的全部或部分内容。 作者签名： 日期： 导师签名： 日期： 摘要 摘要 摘 要 Annexin A2（ANXA2）是一种钙依赖性膜磷脂结合蛋白，存在于生物体的多种细胞类 型中。脊椎动物细胞的 Annexins 被命名为 Annexin A 家族。其中 Annexin A2 由 339 个氨 基酸组成, 分子量为 36 kD, 主要表达于内皮细胞、单核细胞及某些肿瘤细胞中，主要参与 细胞膜的形成、细胞膜的转运、胞吞胞吐作用、细胞增殖活动、细胞信号转导、分化及凋 亡过程以及血管生成等重要的细胞生命活动。ANXA2 基因在多种肿瘤中经常上调表达， 如卵巢癌。根据先前的研究结果，我们也发现 ANXA2 基因在高产蛋率鸡卵巢中表达上调， 该结果表明 ANXA2 基因与禽类卵泡发育成熟相关。 本研究利用荧光定量 PCR 技术，我们研究了 ANXA2 mRNA 在鸡卵巢成熟和卵泡发育 过程中的表达变化，结果显示，在未开产鸡卵巢（6 周龄）中 ANXA2 mRNA 的表达较低， 随着年龄的增长，在开产鸡卵巢（23 周龄）中 ANXA2 mRNA 的表达极显著升高（P 0.01）。 本实验还收集了产蛋高峰期蛋鸡的各级卵泡，包括 POF1（the first post-ovulatory follicle）、 F1（the first large follicle）、F3（the third large follicle）和小白卵泡（SWF，the small white follicle），荧光定量 PCR 检测到不同卵泡中 ANXA2 mRNA 的表达情况如下：从等级前卵 泡到排卵前卵泡，随着卵泡的发育，ANXA2 mRNA 的表达逐渐增加（P 0.01）；多次重 复实验显示 F1 卵泡的 ANXA2 mRNA 表达水平最高，表明 ANXA2 基因很可能与参与排卵 过程；POF1 卵泡的 ANXA2 mRNA 表达水平显著下降（P 0.01），并且和 SWF 卵泡中的 ANXA2 mRNA 表达水平相当。我们分离了 F1~F4 卵泡的膜细胞和颗粒细胞，荧光定量 PCR 结果表明 ANXA2 mRNA 在膜细胞中的表达极显著高于颗粒细胞（P 0.01）。在卵泡膜细 胞中， FSH 和雌激素可促进 ANXA2 基因的表达，而 LH 和孕酮对 ANXA2 基因的表达无 显著作用。另外，本研究进一步证明了 FSH 诱导 ANXA2 基因表达的调控区为核心启动子 区。本实验还采用真核基因过表达技术研究了 ANXA2 基因的表达调控机制，将构建好的 真核过表达载体转染到分离培养的鸡卵泡膜细胞中，结果表明，过表达膜细胞 ANXA2 基 因可促进血管生成因子及其受体的转录表达。而且，过表达 ANXA2 增加了血管内皮生长 因子 A（VEGFA）的分泌量，促进了膜细胞的增殖。 我们目前的研究不仅为 ANXA2 基因在鸡卵巢中的表达调控提供了首要证据，而且表 明了 ANXA2 和卵泡血管生成有关，并有助于卵泡的发育和成功排卵。 关键词：鸡；卵巢；卵泡；膜细胞；ANXA2 基因；类固醇激素；过表达；血管生成 Ⅰ Abst Abstract Abstract Annexin A2 (ANXA2) is a calcium-dependent, phospholipid-binding protein found in various cell types. In vertebrate cells, Annexins was named Annexin A family