环氧化酶2在翼状胬肉新生血管形成中的作用及机制研究-眼科学专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 - - 2 - 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 COX -2 cyclooxygenase 2 环氧化酶 2 VEGF PDGF vascular endothelial growth factor platelet-derived growth factor 血管内皮生长因子 血小板源性生长因子 MVD density of microvessels 微血管密度 DAB 3,3′-diaminobenzine 二氨基联苯胺 CD31 the Cluster of Differentiation 31 分化群 31 h hour 小时 Fig figure 图 Tab table 表 n number 样本数量 p Probability 概率 PBS Phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 SPSS Statistical package for the social science 社会科学统计软件包 PAGE PAGE 3 环氧化酶 2 在翼状胬肉新生血管形成中的作用及机制 研究 摘 要 目的 翼状胬肉是我国常见眼表疾病之一，本病尚无有效的药物治疗，手术切除是 目前治疗翼状胬肉的主要方法，但手术后并发症多且手术后的复发率很高，所以 治疗相当棘手，因此进一步研究翼状胬肉的发病机制十分必要。本实验旨在研究 翼状胬肉中 COX-2 与新生血管的表达情况，探讨 COX-2 在 翼 状 胬 肉 新 生 血 管 生 成 和 发 展 中 的 作 用 ，为 探索 翼 状 胬 肉 的 靶向 治 疗 提 供 新的 理 论 依 据 。 方法 使用苏木素-伊红染色（HE 染色）法及免疫组化的方法对实验标本进行研究。 第一步：临床收集组织标本用于切片制作。门诊手术获得正常球结膜组织 23 例， 翼状胬肉组织 45 例，术前裂隙灯检查排除参与者其他角结膜性疾病。所有组织经 过固定剂固定，浓度依次递升的乙醇脱水，使用石蜡包埋，组织切片，并做好标 记并保存备用。第二步：HE 染色法观察翼状胬肉与正常球结膜组织的形态学差异。 取切片，经脱蜡后苏木素浸染 5 min，将细胞核染成蓝色，盐酸酒精分色后伊红染 色 10 s，切片脱水、透明后中性树胶封片，显微镜下观察。第三步：免疫组织化学 方法分别检测翼状胬肉和球结膜组织中 COX-2、VEGF、PDGF 与 CD31 分布及表 达情况。取切片，经脱蜡后置于 PH6.0 的抗原修复液中高热修复 6 min，3％去离 子水封闭内源性抗原，在不同组织编号的玻片上分别加入一抗，4 ℃孵育过夜， 冲洗后加入对应二抗，DAB 显色，显微镜下观察并计数。 结果 （1）HE 染色后正常球结膜组织与翼状胬肉组织中形态学表现：正常球结膜 组织表层上皮细胞排列整齐，基底上皮细胞边界清晰，间质血管少；翼状胬肉翼 状胬肉组织表现为上皮层及基质浅层成纤维细胞增殖，表层上皮细胞排列紊乱， 细胞体积增大，基底上皮边界模糊，间质中新生血管大量增生。（2）免疫组织化 学方法分别检测翼状胬肉和球结膜组织中 COX-2、VEGF、PDGF 与 CD31 分布及 表达情况：23 例球结膜组织中均为呈阴性，翼状胬肉组织样本中有 36 例 COX-2 表达阳性 (P 0.01)； CD31 在两种组织中均有表达，通过计数及统计，翼状胬肉 组织中 MVD 为 20.3±4.4，球结膜组织中 MVD 为 9.7±2.8 (P0.01)； COX-2 表 达阳性的翼状胬肉组织中 MVD 为 19.06±1.84，表达阴性的翼状胬肉组织中 MVD 为 10.44±2.98 (P0.01)。翼状胬肉组织切片中 34 例 PDGF 表达阳性， 36 例 COX-2 表达阳性的胬肉组织中 32 例 PDGF 阳性；翼状胬肉组织切片中 39 例 VEGF 表达 阳性，36 例 COX-2 阳性的胬肉组织中 34 例 VEGF 表达阳性；差异有统计学意义 （P0.005）。在促进翼状胬肉新生血管生成过程中 COX-2 的表达与血管相关因子 VEGF 和 PDGF 具有相关性 (r＝0.458, r＝0.621)。 结论 本实验研究发现翼状胬肉组织中 MVD、VEGF、PDGF 以及 COX-2 的表达 明显强于正常球结膜组织，另外，COX-2 可能协同 VEGF 及 PDGF 共同刺激翼状 胬肉新生血管的发生。以上结果不仅证实 COX-2 在翼状胬肉的发病中发挥重要的 作用，同时进一步证实翼状胬肉属于紫外线诱导相关肿瘤性疾病。 关键词 翼状胬肉；环氧化酶 2；新生血管 The expression of cyclooxygenase 2 promotes the neovasculariz