鸡传染性支气管炎病毒0801株的分离鉴定及S1基因序列分析-预防兽医学专业论文.docxVIP

山东农业大学硕士学位论文 山东农业大学硕士学位论文 鸡传染性支气管炎病毒 鸡传染性支气管炎病毒 0801 株的分离鉴定及 S1 基因序列分析 PAGE PAGE 1 PAGE PAGE 2 中 文 摘 要 鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis, IB）是由冠状病毒科（Coronaviridae）传 染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus, IBV）引起的一种急性高度接触性传染病。 该病主要侵害鸡的呼吸系统、消化系统和泌尿生殖系统，可以引起雏鸡死亡，蛋鸡产蛋 量及蛋品质下降，给养禽业造成巨大的经济损失。IBV 突出的特点是血清型众多，且新 的血清型和变异株不断出现，给本病的防治带来很大困难，免疫失败现象时有发生，所 以从现地分离株中筛选疫苗株对控制 IB 非常重要。 IBV 的基因组为不分节段的单股正链 RNA，编码三种主要结构蛋白（纤突蛋白 S， 膜蛋白 M 和核衣壳蛋白 N）及其它蛋白。IBV 的 S 蛋白可以裂解成 S1 和 S2 两个亚单 位。S1 是重要的免疫原蛋白，能诱导产生中和抗体和血凝抑制抗体，并且与病毒的组 织嗜性有关。S1 基因的点突变、插入、缺失或者重组是 IBV 产生新血清型，亚型和变 异株的主要原因，对于 S1 基因的变异与病毒的抗原性的改变之间是否存在一致性尚不 清楚。故对 S1 基因深入研究具有重要意义。从分子水平研究 S1 基因的分子结构和遗传 进化特点，可以为 IB 的防控提供可靠的理论依据。 2008 年 1 月，河北沧州某产蛋鸡场鸡群出现以呼吸道症状为主的疾病症候，并迅 速波及全群，少数几只出现死亡，死亡率约 0.5%。剖检发现鸡只肾脏肿大，有尿酸盐 沉积，呈“花斑肾”样，其它脏器器官未见明显病变。已知该鸡群曾按正常程序进行接 种过 IBV H120 疫苗。本试验收集患病鸡只肾脏、气管等组织，进行病毒分离培养。通 过新城疫病毒干扰试验、致鸡胚矮小化试验、血凝特性试验、动物回归试验以及分子生 物学试验等证实分离到的 0801 株为一株传染性支气管炎病毒。 交叉中和实验结果显示，0801 株与 Ma5、W93、H120、M41、H52 株的关系系数 R 分别为 80.7%、67.7%、73.3%、54.0%、70.8%。依据判定标准（R80%，两毒株为 同一亚型；25%R80%，两毒株为同一血清型的不同亚型；R25%，两毒株为不同的 血清型），判定 0801 株与疫苗株 Ma5、W93、H120、M41、H52 株均为同一血清型，其 中与疫苗株 Ma5 株为同一血清型的同一亚型。 本研究中对 0801 株 S1 基因进行了序列测定，并与国内外已发表参考株 S1 基因进 行了比较分析，结果表明，0801 株与当前普遍应用的 Massachusetts 型疫苗株 H120、 H52、Ma5、M41 及国内疫苗株 W93 株核苷酸同源性约为 75%，推导氨基酸序列对比 结果显示同源性亦约为 75%，同时与 Genbank 注册的 Arkansas、Conn、Gray、793/B 等 血清型同源性差异亦在 20%以上。而 Genbank BLAST 对比结果显示 0801 株 S1 基因与 国内分离株 LC2、WF 株 S1 基因同源性最高，其核苷酸同源性高达 99%，氨基酸同源 性亦接近 99%。序列分析结果显示 0801 株 S 蛋白裂解位点序列为 RRFRR，符合传支毒 株裂解位点序列。 关键词：传染性支气管炎病毒；鸡胚交叉中和试验；S1 基因；序列分析 Isolation and Sequence Analysis of S1 Gene of Avian Infectious Bronchitis Virus 0801 strain Abstract Avian infectious bronchitis virus （IBV）, a member of Coronaviridae ,could cause a highly infectious, contagious and pathogenic in chickens, which mainly invaded chicken respiratory, urogenital and digestive systems. IBV could cause respiratory disease and eggs production losses and has a high rate of mortality, resulting in great economic losses to the poultry industry worldwide. There are