生物化学仪器分析实验.docVIP

PAGE 1 PAGE 35 生物化学仪器分析实验 （内部教材） 北京理工大学珠海学院生物工程教研室 2012年2月修订 说 明 生物化学仪器分析实验教学是学生掌握各种仪器及其分析方法的重要环节。通过实验教学，要求学生能规范地掌握生物化学分析仪器的基本操作、基本技术，熟悉现代分析仪器的使用（主要包括紫外可见分光光度计、气质联用仪、液相色谱仪、薄层色谱、凝胶色谱等）；在培养学生掌握实验的基本操作、基本技能和基本知识的同时，努力培养学生的创新意识与创新能力。为实现这一目标，在课程内容安排上采用保留一定的经典性的验证性实验内容外，还将基本操作融入综合实验中，在实验内容方面更注重于复杂实际样品分析。 为使学生在学习中，能及时按系统了解和掌握生物化学仪器分析实验各类实验研究方法，及涉及的基本技术和技能方面的系统知识，实验课教学的基本环节采取实验技术讲座与学生实验相结合进行。实验技术讲座内容包括：各种光度计的操作技术和工作原理；薄层与液相色谱法的基本应用。通过讲座要求学生对化学实验的基本方法、基本仪器与装置的工作原理，构造特点及规范操作程序和仪器较正方法，有较系统全面的了解与掌握。 实验能力主要是指以下诸方面：动手能力、理论联系实际的能力、统筹思维能力、创新能力、独立分析解决实际问题的能力、查阅手册资料并运用其数据资料的能力以及归纳总结（实验报告）的能力等。在整个实验课过程中，要利用一切环节进行能力的训练。 实验素养主要是指以下诸方面：严谨的科学态度、细致的工作作风、实事求是的数据报告；良好的实验习惯（准备充分、操作规范，记录简明，台面整洁、实验有序，良好的环保和公德意识）；团结协作精神；认真观察实验现象、科学分析实验数据；强烈的求知欲望。 对实验数据和实验结果的要求：实验中所有测量数据都要随时记在专用的记录本上，不可记在其他任何地方，记录的数据不得随意进行涂改。常量分析中的典型实验，其平行实验数据之间的相对标准偏差（RSD）一般不应大于5%；实验结果的误差应不超过±2%。 报告基本内容包括：日期、名称与目的、方法概述、结果与讨论等， 本课程要求学生共完成8个实验课题的学习与训练。 实验考核主要考察学生对各次实验的态度、理解程度、基本操作和实验报告。实验前的预习和准备占总评成绩的20%，实验过程的观察操作和记录占总评成绩的50%，写好实验报告占总评成绩的30%。 实验一 气相色谱-质谱联用(GC-MS)定性鉴定实验 质谱法是将样品分子置于高真空中（10-3Pa），并受到高速电子流或强电场等作用，失去外层电子而生成分子离子，或化学键断裂生成各种碎片离子，然后在磁场中得到分离后加以收集和记录，从所得到的质谱图推断出化合物结构的方法。(质谱法是利用电磁学原理将样品分子转化为带电荷的气态离子，并按照质荷比（m/z）将其分离并记录下来，从而获得分子结构的方法)。质谱法具有分析速度快、灵敏度高以及可以提供样品分子的相对分子质量和丰富的结构信息的优点。 气相色谱法（gas chromatography, GC）是一种应用非常广泛的分离手段，它是以惰性气体作为流动相的柱色谱法，其分离原理是基于样品中的组分在两相间分配上的差异。气相色谱法虽然可以将复杂混合物中的各个组分分离开，但其定性能力较差，通常只是利用组分的保留特性来定性，这在欲定性的组分完全未知或无法获得组分的标准样品时，对组分定性分析就十分困难了。随着质谱（mass spectrometry, MS）、红外光谱及核磁共振等定性分析手段的发展，目前主要采用在线的联用技术，即将色谱法与其它定性或结构分析手段直接联机，来解决色谱定性困难的问题。 质谱法要求纯样的特点，使它的应用受到一定限制，对混合物的分析无能为力。气相色谱仪是一种很好的分离用仪器，但定性能力很差，二者结合起来，则能发挥各自专长，使分离和鉴定同时进行，现已成为一种强有力的、可以分离和鉴定复杂混合物组成及结构的可靠手段。由于该法具有灵敏度高，样品用量少，分析速度快，分离和鉴定同时进行等优点，因此，质谱技术广泛的应用于化学，化工，环境，能源，医药，运动医学，刑侦科学，生命科学，材料科学等各个领域。 【实验目的】 （1）了解质谱仪器的基本结构、工作原理及质谱检测器的调谐方法； （2）了解气-质联用的基本原理及硬件接口； （3）学习气-质联用定性坚定挥发性多组分混合物的方法； （4）学习质谱图解析基本方法及质谱标准谱库的检索方法。 【基本原理】 气相色谱仪是质谱法的理想“进样器”，试样经色谱仪分离后以纯物质形式进入质谱仪，就可以充分发挥质谱仪的特长；质谱仪是气相色谱仪的理想“检测器”，色谱法所用的检测器如氢焰电离检测器、热导池检测器、电子捕获检测器等都有局限性，而质谱仪能检出几乎全部化合物，灵敏度又很高。所以色谱-质谱联用技术既发挥了色谱