蛋白质的裂解.pptVIP

第五章蛋白质的裂解 用Edman降解法测多肽链的氨基酸顺序，一次只能连续降解数十个残基，用手工方法最多测二十多个残基。然而，自然界蛋白质的分子量通常在一万以上，因此在测多肽链顺序时，需将它们先裂解成一系列小肽，分别测出它们的顺序，然后再找出它们的接头位置，才能定出该肽链的顺序。所以如何选择肽链裂解的切点，将对顺序测定起着重要作用 裂解条件要求： 裂解点少 专一性强 反应产率高 裂解方法： 酶法 化学法 酶解和化学裂解是顺序分析中互为补充缺一不可的手段 三、蛋白质的化学裂解 是蛋白质顺序测定中的另一重要手段 产物的肽段一般都比较大 裂解产物适合于在自动顺序仪中测定顺序 产物有利于肽段的吻合 因此化学法对较大分子量的蛋白质顺序测定是重要的 CNBr裂解蛋氨酸残基的反应机理： CNBr 裂解肽链的甲硫氨酸羧基所形成肽链的反应 在酸性条件下氨基质子化，可以避免一些副反应 如：用70％甲酸可以破坏肽链的卷曲，使甲硫氨酸侧链暴露，有利于CNBr的裂解 甲硫氨