螺旋藻蛋白酶解工艺的优化及抗氧化肽的分离鉴定-微生物学专业毕业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 螺旋藻蛋白酶解工艺的优化及抗氧化肽的分离鉴定目 螺旋藻蛋白酶解工艺的优化及抗氧化肽的分离鉴定 目 录 摘要 i ABSTRACT ．ii 第一章前言 1 1．1螺旋藻 ．．1 1．1．1螺旋藻的营养物质和活性成分 2 1．1．2螺旋藻的生理功能 3 1．1．3螺旋藻的应用现状 4 1．2生物活性肽 一7 1．2．1生物活性肽的简介 7 1．2．2生物活性肽的生理功能 7 1．2．3生物活性肽的制各 9 1．2．4生物活性肽的分离纯化 ．10 1．2．5多肽抗氧化性的研究 ．12 1．3蛋白产品的应用现状 13 1．3．1饲料 ．．13 1．3．2食品 ．．14 1．3．3化妆品 ．1 5 1．4研究目的和意义 16 第二章酶解螺旋藻制备高活性多肽的研究 17 2．1材料 17 2．1．1原料 ．．17 2．1．2试剂 一17 2．1．3主要仪器 ．17 2．2方法 18 2．2．1分析测定方法 ．18 2．2．2螺旋藻酶解条件的优化 ．2l 2．2．3酶解放大实验 ．23 万方数据 华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文2．2．4产品营养价值分析 华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文 2．2．4产品营养价值分析 ．．23 2．3结果与分析 ．24 2．3．1蛋白酶筛选 一24 2．3．2料水比优化 ．．25 2．3．3酶添加量优化 ．．25 2．3．4温度优化 一26 2．3．5 pH优化 ．27 2．3．6正交试验 ．．28 2．3．7酶解时间的确定 ．．29 2．3．8酶解放大及产品营养价值分析 32 2．4讨论 ．36 2．4．1小结 36 2．4．2酶解工艺中影响多肽转化率的主要因素 ．．36 2．4．3螺旋藻多肽产品品质 ．．37 2．4．4产品应用前景 ．．37 第三章螺旋藻酶解液抗氧化肽的分离鉴定 39 3．1材料 ．39 3．1．1原料 39 3．1．2试剂 39 3．1．3主要仪器 ．．39 3．2方法 ．40 3．2．1分析测定方法 ．．40 3．2．2螺旋藻酶解液抗氧化肽的分离鉴定 ．．4l 3．3结果与分析 ．44 3．3．1螺旋藻肽的抗氧化性 ．．44 3．3．2螺旋藻肽抗氧化组分的分离纯化 ．．46 3．3．3抗氧化肽的氨基酸序列分析 ．．49 3．3．4抗氧化肽的合成验证 一51 3．4讨论 ．52 万方数据 螺旋藻蛋白酶解工艺的优化及抗氧化肽的分离鉴定3．4．1小结 螺旋藻蛋白酶解工艺的优化及抗氧化肽的分离鉴定 3．4．1小结 一52 3．4．2生物活性肽的分离纯化 ．52 3．4．3抗氧化肽的鉴定 ．53 第四章结论与展望 55 4．1主要结论 55 4．2创新点 55 4．3展望 56 参考文献 57 致谢 62 万方数据 螺旋藻蛋自酶解工艺的优化及抗氧化肽的分离鉴定摘要 螺旋藻蛋自酶解工艺的优化及抗氧化肽的分离鉴定 摘要 生物活性肽是由氨基酸组成的具有生物活性的肽类化合物，一般是以植物或动 物蛋白为原料制成。我国优质蛋白资源匮乏，高蛋白含量的生物活性肽作为一种新 型蛋白资源，具有抗菌性、调节血清中血脂水平、促吸收、降血压等功能，同时还 能增强机体免疫力、调节有机体生理机能。本课题以螺旋藻为主要原料，对螺旋藻 蛋白酶解工艺、产品营养成分以及螺旋藻抗氧化组分分离鉴定进行研究，主要结果 如下： (1)以螺旋藻为原料，选用蛋白酶K对其水解制备高活性多肽，确定最佳酶解工 艺条件：料水比1：8、酶添加量700U／g、酶解温度55。C、pH值8．5，酶解时间3 h。 最佳条件下多肽转化率为43．3l％，氨基酸转化率为11．82％，酶解液主要为2～7个 氨基酸残基组成的多肽混合物。 (2)根据优化的最佳工艺条件，进行酶解放大实验，对酶解放大实验的产品进行 营养成分的分析。酶解后产品粗蛋白含量为66．55％，多肽含量为27．35％。原料中 分子量350 KDa的蛋白占69．16％，酶解后占12．99％；原料中分子量1 KDa的多肽 占28．33％，酶解后占62．60％。产品分子量主要分布在613 Da，约6个氨基酸残基。 (3)对螺旋藻酶解液进行生理活性分析，发现酶解液具有较强的抗氧化性，分子 量小于3 KDa的螺旋藻酶解液抗氧化活性最高，当浓度为100 mg／mL时DPPH自由 基清除率可达到92。25％。通过凝胶过滤层析、反相高效液相(RP—HPLC)等技术手 段对该分子量范围的螺旋藻粗肽进行分离纯化，获得一种高活性的抗氧化肽。经鉴 定该抗氧化肽的氨基酸序列为脯氨酸一天冬酰胺．天冬酰胺(Pro．Asn．Asn，PNN)，分 子量343。15 Da。抗氧化肽Pro—Asn—Asn清除自由基的能力与还原型谷胱甘肽(GSH) 相近，当浓度为100 gg／m