玫瑰孢链霉菌支链α酮酸脱氢酶基因功能研究-微生物与生化药学专业毕业论文.docxVIP

独创性声明学位论文题目：邀丝孢垡垂菌塞篮垡卵酸魅氢醛基因勉6＆盈蕉本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中己加了 特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁 在文中作了明确说明并表示衷心感谢。学位论文作者：相黄签字日期：≯旷年(月如日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院(筹)可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：蛴保密，口保密期限至年月止)。学位论文作者签名：0唧唪导师签名：磅7越签字日期：力L，年气月勿日签-：7-日期：卯、f年S月万方数据目录目录摘要．．IAbstract········· ···········-·······························-········ ·-··········-·r-·-·····--····-········---·····r·--·-·-·-III缩略语-．VII第1章综述11．1玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)l 1．1．1概：述．．11．1．2 S roseosporus产生的次级代谢产物一1I．2达托霉素21．2．1 A21978C概述21．2．2达托霉素的发展历史．．31．2．3达托霉素的理化性质．41．2．4达托霉素的抗菌机理．41．2．5达托霉素的市场状况．41．2．6达托霉素的生物合成．51．2．7 S roseosporus产达托霉素的研究．．7 1．3支链0【酮酸脱氢酶的研究现状913．1概述一91．3．2链霉菌中支链d酮酸脱氢酶的研究现状101．4本实验的研究目的和意义．．11第2章实验材料与方法”1 32．1实验材料．．132．1．1菌株和质粒132．1．2培养基142．1．3抗生素152．1．4实验试剂162．1．5主要实验仪器162．1．6所用引物172．2实验方法182．2．1大肠杆菌的生长及保藏182．2．2大肠杆菌质粒的快速提取及重组菌株的筛选鉴定182．2．3大肠杆菌感受态制备及转化18万方数据西南大学硕士学位论文2．2．4 DNA的酶切反应一192．2．5质粒与DNA片段的连接反应192．2．6 S roseosporus的培养及孢子悬液的制备202．2．7接合转移202．2．8 S roseosporus基因组DNA的提取212．2．9＆roseosporus质粒的提取．．212．2．10 RNA的提取222．2．11DNase I处理RNA样品．．232．2．12 RNA浓度和纯度的检测232．2．13 PCR、RNA反转录、实时荧光定量PCR242．2．14癸酸耐受检测一262．2．15细胞膜脂肪酸组成鉴定．．262．2．16抗生素产量测定一272．2．17达托霉素标准曲线的建立～272．2．20不同碳源下体生长检测一282．2．18序列分析工具．28第3章实验结果与分析”293．1 S roseosporus中支链c【酮酸脱氢酶(BCDH)基因的克隆和分析293．1．1bkdl的克隆和分析293．1．2bkd2的克隆和分析293．2载体构建以及重组菌株的筛选．303．2．1 bkdl敲除载体和bkd2敲除载体的构建．313．2．2 bkdl敲除菌株和bkd2敲除菌株的筛选．323．2．3 bkdl过表达载体的构建333．2．4 bkdl过表达菌株的筛选343．2．5 bkdl遗传互补株的获得353-3 bkdl对S roseosporus支链碳源利用的影响353．4支链旺酮酸脱氢酶(BCDH)对S roseosporus癸酸耐受的影响．363．5支链0【酮酸脱氢酶(BCDH)对S roseosporus细胞膜脂肪酸组分的影响一373．6支链0【酮酸脱氢酶(BCDH)在＆roseosporus中的转录水平．393．7支链旺酮酸脱氢酶(BCDH)对A21978C生物合成的影响403．7．1 bkdl敲除对A21978C生物合成的影响．403．7．2 bkdl过表达对A21978C生物合成的影响．41 第4章讨论一43目录4．1 S roseosporus中BCDH基因bkdl和bkd2的确定．．434．2 S roseosporus中支链0【酮酸脱氢酶(BCDH)的功能434．2．1 S roseosporus中bkdl对支链氨基酸代谢的影响一434．2．2 S roseosporus中BCDH对支链脂肪酸合成的