黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血清诱导的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究-药理学专业毕业论文.docxVIP

王锦淳：SSTF对高甘油三酯血清诱导的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 王锦淳：SSTF对高甘油三酯血清诱导的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 3 黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血清诱导的血管 内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 摘要 背景： 随着人们生活水平的提高，生活方式的改变，以及人口老龄化的迅速到来， 心脑血管疾病己成为当今世界上危害人类生命和健康的最主要的疾病。动脉粥样 硬化(arteriosclerosis，AS)是心脑血管疾病的重要病理基础，而血管内皮细胞损伤 是AS发生的始动环节。近年来，国内外研究表明，高甘油三酯(m窑ll triglyceride，HTG)血症是导致AS发生的独立危险因素，它可通过损伤血管内皮 细胞、促进血管平滑肌细胞增殖、引起脂质过氧化、促进血栓形成等启动AS。 在高甘油三酯血症导致AS的过程中，由于活性氧(reactive oxygen species，ROS) 增多引起的氧化应激所致的内皮细胞损伤可能起到了极其重要的作用。活性氧是 调节血管功能状态的重要信号分子，在生理和病理情况下，体内有多种酶参与了 ROS的生成。尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase，NADPH oxidase)目前被认为是血管内生成ROS 的主要酶体，内皮细胞主要表达NADPH氧化酶家族(NOX)中的NADPH氧化酶 4(NADPH oxidase 4，NOX4)。那么，在HTG诱导内皮细胞氧化损伤过程中， 是否通过NADPH氧化酶途径?目前关于这一研究国内外还未见报道，这正是本 课题所要研究的内容之一，期望从新的角度揭示高甘油三酯血症致AS的机制并 为其防治提供理论依据。 黄芩茎叶总黄酮(scutellaria baicalensis stem．1eaf total flavonoid，SSTF)为黄芩 茎叶的提取物，其主要成分为黄酮类化合物。已进行的药理学研究表明，SSTF 对心脑血管系统具有广泛的作用，如抗氧化、降血压、调血脂、改善心脑血管的 供血等。那么，SSTF对HTG诱导的内皮细胞氧化损伤是否有保护作用?其保 护作用机制是否与抑制NADPH氧化酶表达有关?这是本课题所要研究的另一内 容，研究结果有助于为寻找新的抗AS药物作用靶点提供实验依据。 扬州大学硕士学位论文 扬州大学硕士学位论文 4 目的： 1．研究人高甘油三酯(HTG)血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧化损伤效 应，特别是NADPH氧化酶亚型NOX4在HTG致HUVEC氧化损伤中的作 用。 2．观察黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对HTG诱导的HUVEC氧化损伤的保护作用，并 从分子水平探讨其作用机制。 方法： 1．HTG对HUVEC的氧化损伤效应：体外培养HUVEC，分别加入1％、2％、 3％、4％、5％的HTG作用于细胞，在8h、12h、16h、20h及24h，通过四 唑氮(MTT)比色法测定各组细胞活力(OD值)，黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物 歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸反应物(TaA)法测定丙二醛(MDA)含量，流 式细胞仪(FCM)检测细胞内活性氧(ROS)水平，观察HTG对HUVEC的氧化 损伤效应，并确定最佳的HTG作用浓度和时间。 2．NOX4在HTG致HUVEC氧化损伤中的作用：体外培养HUVEC，加入5％ HTG作用于细胞1 6h，通过RT-PCR法检测NOX4 mRNA表达，Western blot 法检测NOX4蛋白表达，观察HTG刺激后HUVEC中NOX4的表达情况。 3．SSTF对HTG致HUVEC氧化损伤的保护作用：终浓度为100mg／L、200 mg／L、400mg／L的SSTF以及阳性对照药物100mg／L的VitC分别与HTG氧 化损伤的HUVEC共同孵育16h，通过检测细胞活力、SOD活性、MDA含 量及ROS水平的变化，观察SSTF的保护作用，并与VitC相比较。 4．SSTF对HTG致HUVEC氧化损伤的保护作用机制：终浓度为100mg／L、 200mg／L、400mg／L的SSTF分别与HTG氧化损伤的HUVEC共同孵育 1 611，通过RT-PCR法检测NOX4 mRNA表达，Western blot法检测NOX4蛋 白表达，观察SSTF作用后HUVEC中NOX4的表达变化。 王锦淳：SSTF对高甘油三酯血清诱导的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 王锦淳：SSTF对高甘油三酯血清诱导的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 5 结果： 1．HTG对HUVEC的氧化损伤效应：MTr结果显示，与Control组相比， 4％ 的HTG作用24h、5％的HTG作用1