凝溶蛋白对骨骼肌天然细肌丝的作用-中国生物化学与分子生物学报.PDF

第13卷 第6期 生 物 化 学 杂 志 V o l13,N o 6 1997年12月 . , 1997　 Ch inese B iochem ical Jou rnal D ec 凝溶蛋白对骨骼肌天然细肌丝的作用 陈　明　李爱媛　周念辉 ( 中国科学院上海生理研究所, 上海 200031) 摘要　凝溶蛋白是 肌动蛋白丝的钙依赖性切割性蛋白质. 经过焦磷酸溶液选择性 F 抽提和微酸性介质的有效分离, 可以得到纯度较高的天然细肌丝. 在 Ca2+ 存在时, 凝 溶蛋白可以切割天然细肌丝. 但是, 凝溶蛋白对天然细肌丝的作用时程与其对 肌 F 动蛋白丝的作用有着显著差异, 提示细肌丝中的非肌动蛋白蛋白质可能影响了凝溶 蛋白对天然细肌丝的结合或者切割速率. 关键词: 凝溶蛋白, F 肌动蛋白丝, 细肌丝, 比粘度 骨骼肌细肌丝由几种结构蛋白质和调节蛋白质按特定的空间结构装配而成. 然而, 肌肉细 胞如何装配精巧的收缩结构和维持微妙的生理功能日益引起注意. H in ssen 等报道肌动蛋白 结合蛋白质凝溶蛋白( ) 在 2+ 存在时, 可以切割 肌动蛋白丝( ) ; 凝 gelso lin Ca F F actin filam en t [ 1 ] 溶蛋白是脊椎动物和无脊椎动物横纹肌肌原纤维的组成成分 . 凝溶蛋白在细肌丝装配和蛋 白质更新中可能具有调节作用. 凝溶蛋白与肌动蛋白 (actin ) 相互作用的机制已有较多研 究[ 2, 3 ] , 而凝溶蛋白与肌肉天然细肌丝(th in filam en t) 的结合和相互作用则不清楚. 新近观察到 凝溶蛋白可与原肌球蛋白(tropom yo sin) 发生特异性结合和凝溶蛋白的活性可能受到肌朦蛋 白(nebu lin ) 的抑制作用[ 4, 5 ] , 表明凝溶蛋白与细肌丝的相互作用可能较为复杂. 1　材料和方法 11　肌原纤维的制备 取新鲜的兔背部和腿部肌肉, 绞碎后, 与含有100 , 5 2 , 1 mm o l L KC l mm o l L M gC l mm o l 乙二醇双乙胺醚 , ′四乙酸( ) , 10 咪唑 ( 70) , 1 , L N N EGTA mm o l L HC l pH mm o l L N aN 3 03 二硫苏糖醇 ( ) , 01 苯甲基磺酰氟 ( ) , 和5 亮抑酶肽 mm o l L D T T mm o l L PM SF g m l ( ) ( ) , 2 000 离心5 . 沉淀再经上述溶液洗涤和离 leup