美洲人参分别在小鼠心肌缺血再灌注和内毒素血症中的心脏保护作用及机制研究-药理学专业毕业论文.docx

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名：墅逸 日期：盟年j月皇日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 日期：过年』月盖日 博七学位论文 博七学位论文 中文摘要 摘要 第一章美洲人参水提取物在小鼠心肌缺血再灌注中的 心脏保护作用及机制研究 研究背景 内皮型一氧化氮合酶(eNOS)是体内重要信号分子一氧化氮 (NO)的主要生理学来源。研究报道，由eNOS产生的NO可通过 抑制心肌凋亡而减轻心肌缺血再灌注损伤。NO的抗凋亡作用与减轻 氧化应激和抑制caspase的激活有关。P13．kinase／Akt信号通路的激活 可上调心肌细胞eNOS的表达和活性。 人参(ginseng)是全世界应用最广的药草之一，主要包括亚洲 人参(Asian ginseng or Panax ginseng C．A．Meyer)和美洲人参 (American ginseng or Panax quinquefolius Linn)，其主要活性成分 是人参皂苷(ginsenosides)。人参具有广泛的药理学作用，包括降血 压，降血糖和抗氧化等。在心血管系统，人参可促进NO的释放，舒 张血管和改善脂质新陈代谢，常用于治疗高血压和心脏衰竭。研究报 道，人参皂苷可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。另有研究表明，人参 皂苷可激活离体大鼠心脏P13．kinase／Akt／eNOS信号通路。 依据P13．kinase／Akt／eNOS通路与心肌缺血损伤密切相关，以及 人参皂苷可影响该信号途径，我们推测美洲人参水提取物减轻心肌缺 血再灌注损伤可能与上调P13．kinase／Akt／eNOS通路及抑制心肌凋亡 有关。 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 方法 动物实验 野生型C57BL／6小鼠口服美洲人参水提取物(以下简称人参) 7天，分别在第0(对照)、1、3、5和7天收集心肌，检测心肌Akt、 磷酸化Akt、eNOS和0【．actinin蛋白表达(Western Blot)。此外，野 生型和eNOS基因缺陷小鼠口服人参7天后，利用心脏冠状动脉左前 降支结扎建立心肌缺血再灌注(ischemia．reperfusion，I／R)模型。采 用Evans blue灌注和TTC染色评价心肌梗死大小；取梗死边缘区心 肌检测心肌凋亡水平(caspase．3分析试剂盒和ELISA)。 细胞实验 分离和培养出生后24 h内的野生型和eNOS基因缺陷新生小鼠 心肌细胞。不同浓度的人参孵育心肌细胞24 h后，检测心肌细胞Akt、 磷酸化Akt、eNOS和0【．actinin蛋白表达(Western Blot)。利用缺氧 再给氧(anoxia-reoxygenation，A／R)模型模拟在体缺血再灌注损伤 诱导心肌细胞凋亡，随后检测心肌细胞caspase．3的活性(caspase．3分 析试剂盒)和胞浆DNA断片(ELISA)评价心肌细胞凋亡水平。 职f甲 皇日7R 小鼠口服人参7天后有显著上调的心肌Akt活性和eNOS蛋白 表达；阻断P13．kinase／Akt通路可抑制人参诱导的eNOS表达。与对 照组相比，人参预处理7天显著抑制缺血再灌注诱导的心肌梗死和凋 亡，而eNOS基因缺陷或利用LY294002阻断P13．kinase／Akt通路均 可取消人参的心脏保护作用。 与对照组相比，人参预处理可显著上调心肌细胞Akt活性和 eNOS蛋白表达；P13．kinase／Akt通路抑制剂LY294002可阻断人参诱 II 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 导的eNOS表达；此外，人参也可增加缺氧再给氧损伤时心肌细胞 eNOS的蛋白表达。人参预处理心肌细胞24 h可显著抑制缺氧再给氧 诱导的细胞凋亡，这种抗凋亡作用在eNOS基因缺陷或LY294002预 处理的心肌细胞中可完全取消。 结论 美洲人参水提取物减轻心肌缺血再灌注损伤与抑制心肌细胞凋 亡有关，其机制是通过P13．kinase／Akt／eNOS途径所介导。本研究结 果