黄芩苷通过A2aR途径抑制小鼠肺间质纤维化的研究-内科学（呼吸病学）专业毕业论文.docxVIP

温州医科大学硕士学位论文SDS 温州医科大学硕士学位论文 SDS sodium dodecyl sulfonate 十二烷基磺酸钠 TBS tri s buffered saline 三羟甲基氨基甲烷缓冲 液盐 DAB diaminobenzidine 二氨基联苯胺 PAGE polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶 TEMED tetramethylethylenediamine 四甲基乙二胺 m巾 horse radish peroxidase 辣根过氧化物酶 rpm revolutions per minute 每分钟转数 GAPDH Reduced glyceraldehyde—phosphate 磷酸甘油醛脱氢酶 dehydrogenase PVDF polyvinylidene fluoride 聚偏二氟乙烯 SPF Specific pathogen Free 无特定病原体 5 万方数据 温州医科大学硕士学位论文黄芩苷通过A2aR途径抑制小鼠肺间质纤维化的研究 温州医科大学硕士学位论文 黄芩苷通过A2aR途径抑制小鼠肺间质纤维化的研究 中文摘要 目的： 1．研究腺苷A2a受体(Adenosine A2a receptor，A2aR)和转化生长因子一B 1(transforming growth factor—B 1，TGF—B 1)介导的细胞外调节蛋白激酶 1／2(extracellular signal regulated kinasel／2，ERKl／2)通路与博来霉素 (bleomycin，BL砌诱导的小鼠肺间质纤维化的关系。 2．研究黄芩苷(baicalin)对小鼠肺间质纤维化的调控作用及其机制。 方法： 将24只雄性A2aR基因敲除小鼠随机分为3组，每组8只，分别为A2aR敲 除正常对照组(AN)，A2aR敲除BLM造模组(AM)，A2aR敲除BLM+黄芩苷组(AB)， 再将24只雄性野生小鼠也随机分为3组，每组8只，分别为野生正常对照组(wN)， 野生BLM造模组(wM)，野生BLM+黄芩苷组(1】|『B)。通过向野生BLM造模组(wM)、 野生BLM+黄芩苷组(WB)、A2aR敲除BLM造模组(AM)、h2aR敲除BLM+黄芩苷组(AB) 小鼠气管注射博来霉素来诱导肺纤维化，并对野生BIM+黄芩苷组(wB)、A2aR敲 除BLM+黄芩苷组C幅)小鼠每天腹腔注射黄芩苷，造模28天。将组织切片进行苏 木精一伊红染色(hematoxylin-eosin staining，HE staining)和马松染色 (Masson staining)，在光镜下进行肺间质显微结构改变以及胶原纤维增生情况 的观察，用透射电子显微镜观察肺组织细胞超微结构的改变，测定肺系数(肺湿 重(rag)／体重(g))反应肺损伤严重程度，检测肺羟脯氨酸(Hydroxypr01ine， HYP)显示肺组织胶原纤维的具体含量，用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定血中的TGF—B l浓度，免疫组化法测定 TGF-B 1、ERKl／2、磷酸化ERKl／2(phosphorylation—ERKl／2，p—ERKl／2)和A2aR 蛋白的在肺组织中的含量及分布情况，蛋白印迹法(Western blot)测定TGF— B 1、磷酸化ERKl／2(phosphorylation—ERKl／2，p—ERKl／2)和A2aR蛋白在肺 中表达量的变化。 结果： 1．肺系数测定，结果显示野生BLM造模组(删)和A2aR敲除BLM造模组(AM) 分别较野生正常对照组(wN)和A2aR敲除正常对照组(AN)明显升高(P均0．01)； 而野生BLM+黄芩苷组(wB)和A2aR敲除BLM+黄芩苷组(AB)分别较野生BLM造模组 (删)和A2aR敲除BLM造模组(AM)显著降低(P值分别O．01和0．05)；而且， 6 万方数据 温州医科大学硕士学位论文同一处理条件下，A2aR敲除组肺系数均高于野生组(正常组PO．0l，造模组P 温州医科大学硕士学位论文 同一处理条件下，A2aR敲除组肺系数均高于野生组(正常组PO．0l，造模组P 0．05，黄芩苷组PO．01)。 2．羟脯氨酸含量检测，结果显示野生BLM造模组(wM)和A2aR敲除BLM造模 组(AM)分别较野生正常对照组(WN)和A2aR敲除正常对照组(AN)明显增多(P均 O．01)；而野生BLM+黄芩苷组(wB)和A2aR敲除BLM+黄芩苷组(AB)分别较野生 BLM造模组(wM)和A2aR敲除BLM造模组(AM)显著减少(P均0．05)；A2aR敲除 BLM造