卵黄免疫球蛋白的分离提取与鉴定.docx

卵黄免疫球蛋白的分离提取与鉴定宋宏新高栋薛海燕（陕西科技大学生命科学与工程学院咸阳·712081）摘要：对氯仿法、辛酸法、水稀释法、水 -辛酸法分离卵黄免疫球蛋白(IgY)进行了比较，结果表明:水-辛酸法 卵黄免疫球蛋白的分离提取与鉴定 宋宏新 高栋 薛海燕 （陕西科技大学生命科学与工程学院 咸阳·712081） 摘要：对氯仿法、辛酸法、水稀释法、水 -辛酸法分离卵黄免疫球蛋白(IgY)进行了比较，结果表明: 水-辛酸法在 9 倍稀释度、pH5.3、辛酸加量 1%条件下，可获得较好效果，进一步用硫酸铵沉淀脱 盐后，提取率达 93.4%，产率达 4.67mg/mL 卵黄，纯度达 85%。 关键词：卵黄免疫球蛋白；水-辛酸法；提取；鉴定 中图分类号：TS201.2 文献标识码：A 文章编号：1005-9989(2003)05-0099-03 Extraction and Identification of Immunoglobulin of Yolk SONG Hong-xin GAO Dong XUE Hai-yan （Life Science ＆ Engineering College, Shanxi University of Science and Technology, Xianyang,712081） Abstract: This study was a comparison of reported methods of extraction of IgY from hen egg yolk. Four methods of lipid removal were compared, followed by a method of immunoglobulin precipitation. The results showed that the method of water-caprylic acid was the best one, the extraction ratio of IgY was 93.4%, and the yield was 4.67mg/mL yolk, the purity was 85%. Key words: IgY; water-caprylic acid;extraction;identification 0 前言 目前，抗体在疾病的治疗、诊断及医药食品的检 验中被广泛地使用。寻找一种经济、快速、高效的生 产提取方法，有着广阔的前景。卵黄免疫球蛋白就是 卵黄中的γ-卵黄球蛋白，由于其蛋白质的物理化学 性质、免疫学性质等方面与哺乳动物 IgG 存在一定差 异，所以在免疫学领域把由鸡卵黄中获得的抗体称为 卵黄免疫球蛋白（Immunoglobulin of Yolk，以下简称 IgY），IgY 的应用主要在于疾病的诊断检测和防治[1]、 兽医临床[2]、食品添加剂[2]及化妆品领域[3]等。 1 材料与方法 1.1 主要试剂 法氏囊病毒(IBDV)中等毒力活疫苗：中牧股份 南京药械厂；IBDV 琼扩抗原：中国兽药监察所； 标准鸡抗体：鼎国生物产品发展中心；兔抗鸡 IgG 抗血清：鼎国生物产品发展中心；IBDV 阳性血清： 中国兽药监察所。 1.2 高免鸡蛋的制备 首免采用饮水免疫法，IBDV 弱毒苗用 5 倍剂 量；10 d 后 2 免，弱毒苗 10 倍剂量，再加上油乳剂 灭活苗进行肌肉注射；再过 10d 进行 3 免，方法同 2 免，只是弱毒苗用量增为 20 倍剂量；然后再根据 具体效价变化进行第 4 次免疫。 1.3 IgY 的分离 1.3.1 氯仿抽提法[4] 取卵黄原液，加入 0.8%PBS 溶液稀释，用漩涡混合仪混合均匀至无明显大块卵 黄液。在搅拌的情况下缓慢加入氯仿，混匀后静置， 4℃过夜。4000r/min 离心 20min，上层水相即为所 要分离的 IgY 初提液。 辛酸法[5] 取卵黄原液，加入 0.8%PBS 溶液 1.3.2 稀释，用漩涡混合仪混合均质，加入正辛酸使终浓 度为 1%，静置。4500r/min 下离心 20min。离心后 分成 4 层，抽取第 3 层清液，即为 IgY 初提液。 法)[6] 1.3.3 水稀释法(WD 取一定体积的卵黄原 液，加 9 倍于卵黄原液体积的蒸馏水，混匀。用稀 酸调 pH 至 5.3，静置。8000r/min 下离心 30min，上 清液即含有所要分离的水溶性 IgY。 1.3.4 水-辛酸法 于水稀释法所制得的上清液中 缓慢加入 1%的正辛酸，搅拌 10min，放入冰箱冷冻 收稿日期：2002－12－30 作者简介：宋宏新(1959-)，男，教授，主要从事生物化学与分 子生物学、食品科学方面