酶法提取云南萝芙木中利血平和育亨宾的工艺研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

摘要云南萝芙木(Rauvolfiayunnanensis 摘要 云南萝芙木(Rauvolfiayunnanensis Tsiang)是我国的重要药用植物，含有多种生 物碱，如利血平、育亨宾、阿马尼新等。其中的利血平主要用于治疗高血压。育亨宾 具有广泛的药理作用，主要被用来治疗男性性功能障碍，也可用于治疗风湿、动脉硬 化等。 纤维素酶和果胶酶能水解植物细胞壁，促进细胞内有效成分的溶出，通过对纤维 素和果胶的分解能简化物质分离纯化的步骤。生物酶降解技术作为提取和分离天然产 物中有效成分的一种新兴技术，被越来越广泛的应用。目前国内暂没有利用酶降解提 取利血平和育亨宾的研究报道。 本文在已有的利血平和育亨宾提取工艺的基础上，进行了纤维素酶和果胶酶降解 植物细胞壁提取云南萝芙木中利血平和育亨宾的实验研究。 首先研究了高效液相色谱法共同测定云南萝芙木中利血平和育亨宾的色谱条件。 色谱柱为VP-0DS C，。。选择流动相为：流动相A，甲醇；流动相B，0．004mol／L二乙 胺；梯度洗脱程序为：O一20min，60％A一40％B；20～40min，A：60％--95％，B：40％---- 5％；流速：lmL／min；检测波长278nm；柱温：30℃。 对比四种提取溶剂：甲醇、95％乙醇、50％乙醇(含0．05mol／L H：S04)、1％乙酸溶 液，比较加酶组和不加酶组利血平和育亨宾提取量。结果表明：未经优化条件下，加 纤维素酶后利血平提取率分别提高了27．93％、25．06％、25．28％、53．01％；育亨宾分 别提高了29．05％、61．19％、31．15％、81．15％。 纤维素酶和果胶酶解提取利血平和育亨宾的最佳反应条件研究：先加酶提后加入 1％乙酸继续提取，结果表明：纤维素酶作用的最佳条件为：pH4．5、温度50℃、时间 4h、酶用量1．2mg／g。。在纤维素酶作用最佳条件下同时加入lmg／g果胶酶，可有效缩 短提取时间，提高提取的效率。确定酶水解条件为pH值4．5、温度50℃、时间4h、 酶用量1．2mg／g，果胶酶lmg／g。与常用的溶剂甲醇、95％7,醇、50％乙醇(含0．05mol／L H2S04)、l％乙酸溶液提取法相比较，加酶提取后利血平提取率分别提高36．68％、 52．69％，32．07％，73．86％。育亨宾分别提高了53．07％，95．52％，47．54％，116．4％。 酶法提取后进行利血平和育亨宾分离纯化的研究。结果表明：酶提取分离的得到 利血平结晶纯度为99．4％；育亨宾粗品纯度为7．87％，相比乙醇提取法纯度和得率都 有提高。 关键词：酶解法； 提取；云南萝芙木；利血平；育亨宾 AB AB STRACT Rauvolfiayunnacnsis Tsiang is all important medicine reso]．1rce plant in our country， which contains many kinds of alkaloids，such aLs敝rpine，yohimbine and ajmalicine．Reserpine acts steadily and permanently in hypertension therapy．Yohimbine has extensive medical value，which Can be applied to cure erectile disfunction， arteriosclerosis and rheumatism． Cellulase and pectinase call decomposed plant cell walls，improveing the extraction rate of active constituents．舡a promising strategy for developing geen chemistry and green chemical engineering，biocatalysis technology been widely used in many field．But there is nO reseach on using enzD-ne catalysis extract of reserpine and yohimbine from Rauvolfia yunnacnsis Tsiang． According to present purification prpcess of reserpine and yohimbine，this paper investigated extract reserpine and yohimbine by cellulase