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( 998 ( Chinese Journal of Pathophysiology 200 , 20( 6) : 998- 1002
[ ] 1000- 718(200 ) 06- 0998- 05
canstatin cDNA*
侯卫红, 袁保梅, 王天云, 柴玉荣, 侯桂琴, 王建民, 薛乐勋
( , 50052)
[ ] : canstatin cDNA ( E. coli) ,
: Trizol RNA, RT- PCR canstatin( m canstatin)
cDNA, pMD18- T canstatin cDNA pET30a( + ) ,
E. coli BL21 IPTG : canstatin cDNA 68 bp, 227 ,
canstatin cDNA 89% , 96% IPTG pET30a( + ) / m canstatin
E. coli BL21 : canstatin cDNA, pET30a( + ) / m canstatin
E. coli BL21 , canstatin
[ ] Canstatin; cDNA ; ;
[ ] R363 [ ] A
1
[ 1]
11 菌株质粒 JM109DH5 BL21
, , , ; pMD18- T TaKaRa ;
, pET30a( + ) Invitrogen
! ( dormancy 12 工具酶及主要试剂 BamH #
therapy) Hind ∃Sac # PyrobestTM DNA polymerase
[2, 3] [ ]
Canstatin Kamphaus TaKaRa ; Trizol Invitrogen ; cDNA
, ∀2 BBI ; TaKaRa
C ( C- terminal globular non -
collagenous domain, NCI) 13 织标本
( angiostatin) [3] ( endostatin) [5]
(restin) [6] , , 2
21 引物的设计 GenBank
, canstatin ∀2 C NCI
canstatin canstatin
canstatin , : 5%- CGGGATCCGTCAGCATCGGCTACCTC
canstatin cD - 3%; : 5%- CCCGAGCTCCAGGTTCTTCATG
NA, , Ecoli CACAC- 3%, 5%BamH #
, Sac#
22 总RNA 的提取 Trizol
RNA100 mg ,
1 mL Trizol 1 min, 5 min,
02 mL , 2 min, 10 000 g ∋
[ ] 2003- 09- 01 [ ] 2003- 11- 12
15 min, 05 mL ,
* [ ] ( No. ;
( No .0122032500) ; 1
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