氯化汞对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素表达的影响-卫生毒理学专业毕业论文.docxVIP

㈩IIi ㈩IIi l l II III U]111 II It IIl Y1 833407 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者：苟、嗨0 畚 日期：钿伽年易月弓日 论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位 论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州 大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者：张咴尔 日期：弦扣年6月)日 醯 醯 每 一 多 摘要 摘要 研究显示，近半个世纪来人类的生育能力有明显的下降，不孕不育症尤其 是男性不育症的人数有逐年增加的趋势，已成为一个影响人类健康和发展的医 学和社会问题。环境污染问题已经成为其中的重要影响因素。汞及其化合物被 广泛地应用于化学工业，军工生产、医药及农业生产等方面，其环境污染和生 殖危害已经受到广泛关注。研究资料显示睾丸是外源性化学物质生殖毒性的重 要靶器官，而汞能透过血．睾屏障在睾丸组织中蓄积，引起睾丸萎缩，精子的数 量、质量下降，最终诱发雄性生殖障碍，但是其作用的途径和机制还不清楚。 相关研究提示这些损害可能是首先通过影响睾丸支持细胞(Sertoli cell，SC)的 功能、结构和数量而引起的。Sertoli的重要功能和原代培养模型的众多优点，使 被其广泛用于外源性化合物的生殖毒性研究中。 目的 该研究以原代培养的大鼠Sertoli细胞为模型，从基因和蛋白水平观察氯化 汞对Sertoli细胞雄激素结合蛋白(androgen binding protein,ABP)和抑制素 (inhibin，INH)表达的影响，为进一步研究无机汞的雄性生殖毒性研究提供理 论依据。 方法 l细胞培养：取18-20日龄清洁级雄性SD大鼠，用胰蛋白酶．胶原酶消化 法分离Sertoli细胞，37C、5％C02条件下培养，48小时后用Tris-HCl液纯化细 胞。 2 Mrr法测定细胞活性：将Sertoli细胞以(24)×105个／ml接种到96孔板， 分别加入含0、10。10、10母、10一、10刁、10击、104、104 moFL浓度的氯化汞工作 液，每个浓度设6个复孔，染毒24d,时后用酶标仪测各孔OD值，确定染毒浓度。 3实时定量RT．PCR法检测ABP和IHN mRNA的表达：将浓度分别为0、 10{、104、lO击、10。5 mol／L的氯化汞工作液加入培养的Sertol细胞内，染毒24h 后提取RNA，检测各染毒组ABP和IHN mRNA的转录水平。 4免疫酶联吸附法(ELISA)测定ABP和lNH蛋白表达：分别取加0、 lO。8、10刁、10击、106 moFL氯化汞工作液染毒24小时后的细胞培养液上清，在 摘要酶标仪上于450nm波长下测定各孔OD值，测定各染毒组ABP和IHN蛋白的表 摘要 酶标仪上于450nm波长下测定各孔OD值，测定各染毒组ABP和IHN蛋白的表 达量。 结果 l 细胞培养结果：细胞存活率在95％以上，24小时开始贴壁生长，48小 时以后开始铺开生长，经Tris．HC!低渗液纯化后Sertoli细胞纯度在90％以上， 细胞生长良好。 2 细胞活性测定结果：各浓度组的氯化汞工作液染毒Sertoli细胞24h后的 OD值结果显示，104mol／L HgCl2能明显影响细胞的存活率，与对照组相比，差 异有统计学意义(PO．05)；其它处理组对Sertoli细胞活性没有明显影响，与对照 组比较，差异无统计学意义(扮0．05)。 3 ABP和INH mRNA表达测定结果：ABP mRNA在10刁和10击mol／L染毒 组的相对表达量与对照组相比，差异有统计学意义(尸．0．05)。IHN mRNA相对表 达量在lO。7、10。6和10。5mol／L染毒组与对照组相比，差异有统计学意义(尸0．05)。 4 ABP和INH蛋白表达测定结果：ABP蛋白表达量在10。6mol／L染毒组与 对照组差异有统计学差异CP0．05)。INH蛋白分泌量在10～、10击和10{moVL染 毒组与对照组相比，差异有统计学意义(尸o．05)。 结论