绿僵菌对东亚飞蝗致病机理的初步研究-农药学专业毕业论文.docxVIP

摘要本文选用两株源于不同采集地、分离自不同种蝗虫的绿僵菌菌株，研究了东 摘要 本文选用两株源于不同采集地、分离自不同种蝗虫的绿僵菌菌株，研究了东 亚飞蜱蝗蝻感染绿僵菌后组织病理变化、东亚飞蝗蜱蝻血细胞对注射分生孢子后 的防御反应、酯酶活性的变化、以及绿僵菌在不同培养基上胞外蛋白酶的产量及 其与毒力问的关系。主要结果如下： 通过组织切片研究表明，绿僵菌主要从东亚飞蝗体表侵入，72h后可见体腔 内有菌丝和组织病变。侵入体内的菌丝在血腔中不断增殖，使得脂肪体、肌肉组 织、马氏管和消化道发生病变解体。96h后，肠壁细胞结构开始疏松、内膜解体。 5d时，多数蝗蝻死亡，消化道内外布满菌丝。 在东亚飞蝗蝗蝻体内注射LA和LD两株绿僵菌的分生孢予液，观察血细胞 总数的变化。在注射15分钟后，两者均使蝗蝻血细胞总数比『F常不注射稍有下 降，30分钟后血细胞总数上升达到晟高数值，随后血细胞总数一直呈下降趋势， 但两者对蜱蝻的影响差异不明显。对注射分生孢子液后的防御反应观察发现，血 细胞能吞噬囊包绿僵菌分生孢子，但是不能阻止其分生孢子的萌发及菌丝的生 长，只能起到暂时的抑制作用。 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测感染LA和LD两菌株后东亚飞蝗蝗蝻酯酶同 工酶的变化显示，同健康幼虫相比，感病蝗蝻的酯酶带变少、变浅，在接近死亡 后期更为明显。与此同时，染菌蝗蝻的乙酰胆碱酯酶活性也比健康蝗蝻活性低， 随时间的推移，感染LD菌株后东亚飞蜱蝗蝻的乙酰胆碱酯酶活性活性下降的比 感染LA菌株的快。 用明胶和虫尸粉两种液体培养基对两株绿僵菌的胞外蛋白酶的产酶水平进 行分析。两菌株的虫尸粉培养基中蛋白酶产量明显高于明胶液体培养基。这说明 虫尸粉中可能含有更适合于刺激绿僵菌产生胞外蛋白酶的特殊营养成分，但LA 和LD菌株问的差异不明显。此外，用明胶琼脂平板法对LA和LD两株菌株的 胞外蛋白酶产量进行了测定，LA和I。D两株菌株的最适产胞外蛋白酶的温度分别 是33℃和27℃。实验结果表明，不管用明胶琼脂平板法还是虫尸粉培养基所测 得的胞外蛋白酶的产量水平，均与其对东亚飞蝗蜱蝻的毒力之间存在线性关系。 [I}|此，可以认为绿僵菌的胞外蛋白酶的产生水平是构成其对东亚飞蜱毒力的一个 主要内在因素。 关键词:绿僵菌 东亚飞虫草致病机理 AbstractIn Abstract In thi icle，two i solates of。胎f矗，方，z，￡所7 a仃?s口p，?aP selected study tho pathogenesi in￡D(。[，sfa用，grafD，，d册j，77／P门s』s(Meven)．The hi stopathology ，de Fefls。 of hemocytes， change of the 【otaI hemocytes，ostcras。ac i Vi Ly￡【nL【uxt racol luIar L。aso()t_Lhe nfuc Led nymphs of ￡口c￡，sf矗 胛詹，a￡f，，‘ja历H，7，』P门s，s(Meyen) stLIdicd．．rh。 pri re-ul【s fol lowh： The resul of’hi st()IogiaI i。n observ}【t io几s imnl i。cl hit【the 5一th Lar兀ymphs i Lho爪ajor invasion Jf 垤，f爿，力j#j￡脚 ；f，7js。p，j甜p．Af‘ter 72 hr of i nocul“t1。n，the hyphae Lll d bc(1hH。r_ved in h。 c()。1 cl began repr()LJ LIc。(1 i th。hcmocoele．An({Lh。n，￡he。pi pl()on， Llscl tissue，mnIpi ghian tubLI【。s}【nd dj gestive on{【s。ries c)f p}1thologi cal changos．Th。cc【l i the mid“L【t ishu。s w。r。r÷lref￡lcti()n nnd inn。r m。mhr disi ntegrated．MoHt()f1 th。nymphs(Ii ed th。fil‘th (Irly，}Lnd Lhe digesti fj l l。d with hyphac outside}【n(【i nsi dc． h]the 5一th instar nymphs￡Dc￡，s ra胛jg，’f2f。，’?d厅脚门j，P，7sjs，changes i the h。mocytes popuIation ef．ftected folI。wi the i njcction wi th the