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细胞化学pas实验报告 　　实验一：细胞的形态观察及其大小测量　　一、实验目的：　　1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构；　　2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。　　二、实验材料和仪器：　　小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；　　普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。　　三、实验步骤：　　(一)细胞形态观察　　l、动物细胞的观察　　人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。　　鸡血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。　　2、植物细胞的观察　　取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。　　细胞的大小和测量　　1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。　　2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。　　3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。　　4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：　　镜台测微尺的格数　　目镜测微尺每格的微米数=—————————×10　　目镜测微尺的格数　　四、实验结果：　　1、目镜校正：40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=　　2、细胞大小的测量：　　五、作业与思考：　　1、血细胞按含量高低，主要含有：红细胞，白细胞，血小板。　　白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。红细胞：主要的功能是运送氧。白细胞：主要扮演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。血小板：止血过程中起着重要作用。细胞形态见下图。　　2、植物细胞一般比动物细胞大一些。形态图见下。　　3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小基本一致，但有一些偏差。放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。　　实验二：PAS反　　应显示糖原和其它多糖物质　　一、实验目的　　1、熟悉PAS法原理及操作步骤；　　2、观察PAS反应的染色结果，并观察多糖在组织细胞中的分布。　　二、实验原理　　多糖是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。一些不溶性的多糖构成植物和动物的骨架，如植物的纤维素和动物的甲壳素，一般称为结构多糖。另一些多糖在生物体内作为能量贮存，如淀粉和糖元，在需要时可以通过生物体内酶系统的作用分解，释放出单糖。　　三、实验用品：　　过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、苏木精溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯。　　梯度乙醇溶液：100％，95％，90％，80％，70％，50％各两份，一份用于脱腊复水，一份用于脱水。　　载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片、土豆；小鼠肝细胞石蜡切片。　　四、实验步骤:　　土豆切片的观察　　制作土豆徒手切片→过碘酸处理15～30min→70%乙醇1min→schiff试剂15min→亚硫酸水漂洗2～3次→蒸馏水漂洗→镜检　　小鼠肝细胞切片的观察　　取鼠肝石蜡切片→二甲苯脱蜡约10min→二甲苯+100%乙醇→梯度乙醇脱二甲苯，在各浓度乙醇中约2～3min→过碘酸氧化15～30min→蒸馏水漂洗→Schiff试剂15～30min→亚硫酸水漂洗2～3次→蒸馏水漂洗→苏木精染色10min→流水冲洗→梯度乙醇脱水，在各乙醇浓度中约2～3min→100%乙醇+二甲苯2～3min→二甲苯适度透明→指甲油封片→镜检　　五、实验结果：　　六、作业与思考:　　1、描述土豆切片和鼠肝切片中糖原分布特点。　　土豆切片中，多糖多在细胞质液泡中。　　鼠肝切片中，多糖多在靠近核的区域。　　2、影响PAS反应染色效果的关键步骤是什么？　　Camey固定液固定；Schiff染色液染色；对分色的控制。　　3、如何制作徒手切片？应注意什么才能得到薄而均匀的切片？　　应注意需要连续快速地切下多片薄片，并从中选出较好的切片。土豆切片观察鼠肝切片观察　　实验三：叶绿体的分离与荧光观察　　一、实验目的：　　1、通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法。　　2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。　　二、实验原理：　　将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。将匀浆液1000r/min的条件下离心2min,以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。然后，在3000r/min的条件下离