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蛋白质的性质实验实验报告 　　生物化学实验报告　　姓名：XXX　　学号：XXXXXXXXXX　　专业年级：XX级护理　　组别：第六实验室　　生物化学与分子生物学实验教学中心　　实验名称　　实验日期XX-10-18合作者评分　　Folin-酚试剂法测定蛋白质含量　　实验地点指导老师　　教师签名　　第六实验室　　批改日期　　一、实验目的　　1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。　　2、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。3、熟悉分光光度计的用法。　　二、实验原理　　1、在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质-Cu2+复合物。　　2、蛋白质-Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。　　3、在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。　　三、材料与方法：　　1.实验材料样品　　健康人血清；正常人血清蛋白质含量：60~80g/L试剂　　牛血清白蛋白标准液；碱性硫酸铜溶液；Folin-酚试剂仪器与器材　　V-1100分光光度计；恒温水浴箱；试管6支、试管架；加样枪、加样枪架；坐标纸　　2.实验步骤流程图：　　取6支试管做好标记，再按下表加样：　　试剂牛血清白蛋白标准液样品液　　蒸馏水碱性硫酸铜Folin-酚试剂蛋白质浓度　　1--　　0　　2-　　40　　3-　　80　　4-　　120　　5-　　160　　6-　　未知　　往各试管中按表格要求加入蛋白标准液、样品液、蒸馏水及碱性硫酸铜试剂后，混匀室温静置10min。　　向各管内加入Folin-酚试剂，并于2s内迅速摇匀。加样完毕后，将各试管进行40℃水浴10min。　　冷却至室温后，以500nm波长比色，以1号管作空白对照，按2-6顺序测定试管内溶液吸光度并重复测三次，记录数据并计算结果。　　四、结果与讨论：　　1.结果：　　数据记录：　　各管A值　　测定次数　　2　　123各管平均值A500　　3　　　　4　　　　5　　　　6　　　　实验现象：　　①向各试管中加入2ml碱性硫酸铜溶液并摇匀后，溶液无明显变化；　　②在向试管中加入Folin-酚试剂并立即摇匀后观察到：溶液先变黄后变浅蓝，且蓝色随时间延长而有所加深。　　绘制标准曲线：　　以A500值为纵坐标，牛血清白蛋白标准液浓度为横坐标，绘制标准曲线　　试管CA(吸光度）　　10　　240　　380　　4120　　5160　　6--　　结果计算：　　将测得样品管吸光度代入标准曲线公式y=中，得出样品浓度为μg/ml。　　即：C=C×2×300　　=μg/ml×600=73638μg/ml　　=/L　　正常人血清蛋白浓度参考范围为：60~80g/L　　以上根据所得实验数据分析得出的待测蛋白浓度在正常范围内，可认为本次实验成功。　　蛋白质的性质实验　　蛋白质及氨基酸的呈色反应　　一、目的　　1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。二、呈色反应双缩脲反应1．原理　　尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。含有　　一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH—NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团的物质以及　　一切蛋白　　质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。2．试剂3．操作　　取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10％氢氧化钠溶液约1mL，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。　　向另一试管加卵清蛋白溶液约1mL和10％氢氧化钠溶液约2mL，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。　　茚三酮反应1．原理　　除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。　　β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。