绿色荧光蛋白生色团的荧光增强及其在细胞成像中的应用-高分子化学与物理专业毕业论文.docxVIP

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万方数据 万方数据 上海交通大学 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定, 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版, 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密□,在 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密□。 (请在以上方框内打“√”) 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 绿色荧光蛋白生色团的荧光增强及其在细胞成像中的应用 摘要 绿色荧光蛋白(GFP)具有特殊结构,在受到蓝光或紫外线刺激时可以发射 绿色荧光,并不需要任何协同因子、底物,因此自发现以来就受到人们的极大关 注。由于其荧光稳定,检测简单,结果真实可靠,并且对光漂白、氧化剂、还原 剂以及其他许多化学试剂具有极强的稳定性,易于构建载体,因此适合用作普遍 的报告标记,尤其适合于活体细胞或组织。目前,GFP 已经广泛应用于基因表达 标记、蛋白质定位、生物传感器、分子生物学、生物探针和生物成像等领域。 GFP 的发光机理可简要描述为:GFP 通过折叠促使内部三个氨基酸形成生 色团,同时折叠链通过分子内氢键使 GFP 形成筒状结构而生色团被束缚在中间。 由于生色团分子自由旋转被限制,从而表现出强烈的荧光。如果这种结构解组装, 则 GFP 的荧光非常微弱。从本质上讲,GFP 荧光增强是因为蛋白分子从低级结 构形成筒状结构时内部生色团自由旋转受到限制,因此可以认为 GFP 通过分子 自组装增强了自身的荧光性能。 为了模拟 GFP 的发光过程,本文首先通过 2,3-环加成法合成了 GFP 生色团 分子,并根据需要对其中一个生色团分子末端羟基进行了丙烯酰化和甲基丙烯酰 化的修饰。对所得大部分中间体和所有产物进行了核磁、高分辨质谱以及红外的 表征,并对所有数据进行了详细分析。所得核磁数据和质谱数据都证明了相应中 间体或产物的结构及分子量,红外数据进一步证明了其结构。 然后通过合成的聚乙二醇大分子引发剂引发甲基丙烯酸甲酯进行原子转移 自由基聚合,获得了不同分子量的两亲性嵌段聚合物,核磁、红外、凝胶渗透色 谱等证明了合成产物的结构。然后根据 GFP 的发光原理,将合成的两亲性聚乙 二醇-b-聚甲基丙烯酸甲酯与生色团进行自组装形成纳米粒子,并用动态光散射 和透射电镜表征了其尺寸及结构。聚合物与生色团组成的纳米粒子模拟了 GFP 生色团的发光,并被成功地用于细胞成像。光学性能的表征证明了对 GFP 发光 的成功模拟,而细胞成像则验证了其应用。由于两亲性聚合物合成的可设计性、 分子量和链段的可调控性、组装体制备的简便性,使得通过聚合物自组装包覆生 色团进行成像有良好的应用前景。 关键词:绿色荧光蛋白(GFP),生色团,两亲性嵌段聚合物,自组装,成像 I FLUORESCENCE ENHANCEMENT OF GFP CHROMOPHORE AND ITS APPLICATION IN CELL IMAGING Abstract The green fluorescent protein (GFP) is a protein with special structure that exhibits bright green fluorescence when exposed to light in the blue to ultraviolet range without any cofactor or substrate. GFP has attracted great attention since its discovery. GFP possesses potential in maker especially in live cell or tissue due to its stable fluorescence, simple measurement, reliable result and high stability to photobleaching, oxidant, reductant and many other chemical reagents. Now, GFP has been applied in many areas like gene expression, protein localization, biosensor, molecular biology, bioprobe and imaging. To mimic the GFP fluorescence behaviour, we first syn

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