枯草芽孢杆菌B411的绿色荧光蛋白标记及其水体净化作用的研究-微生物学专业毕业论文.docxVIP

华中农业大学硬士学位论文枯草芽孢杆菌B411的绿色荧光蛋白标记及其水体净 华中农业大学硬士学位论文 枯草芽孢杆菌B411的绿色荧光蛋白标记及其水体净 化作用的研究 摘要 本课题主要包括两个方面的研究：(1)桔草芽孢杆菌B411的绿色荧光蛋白 标记。以质粒pADl23为模板扩增出绿色荧光蛋白基因(gfp)编码序列，连接 到枯草芽孢杆菌整合载体pAXc，构建重组质粒pAXc．gYp。pAXc．gfp线性化历 转化B411菌株，获得重组子B412，以B412为指示菌投放入水体，利用其荧光 标记跟踪检测了B412在水体中的消长，结果表明B412在无抗生素压力下能稳 定表达GFP蛋白，菌体在水体中能存活较长时间(16 d)，试验期间菌数变化 介丁5．5×103 cfu／ml 8．9×104 cfu／ml之间。(2)枯草芽孢杆菌B411水体净化作 用的研究。人工模拟了水体老化的过程，分析了有机质种类、有机质浓度、溶氧、 湿度、酸碱度、底泥及净水微生物与水体老化的关系。研究了自然环境下投菌对 水体老化的影响。结果表明，水体老化是有机质、溶氧、温度等各因素综合作用 的结果。有机质种类与水体老化的关系：含蛋白质丰富的水体，老化速度最快， 含糖类丰富的水体，老化速度最慢。有机质浓度与水体老化的关系：在低溶氧下 r耋0．10 mg／L)，有机质浓度低于0．1‰时，水体不老化，有机质浓度超过一定 值(毫0．2‰)时水体老化，且水体老化并不与有机质浓度一一相关，老化顺序 依次为0．2700、0．4％o、0．6％o、0．8‰和1．O‰；高溶氧下(耋1．34 rag／L)，有机质 浓度低于0．4‰时水体不老化，高于或等于0．4700是水体老化有不同程度发生，老 化顺序与有机质含量一一相关，依次为1。O‰、0。8％o、0，6％o和0．4％o。温度与水 体老化的关系：温度(15℃、20(2)较低能延缓或避免水体老化，较高温度(25 ℃、30C)时水体老化速度较快，第4天时水体开始变黑，20℃和15℃培养的 水体在同一时间下几乎无变化。pH与水体老化的关系：pH 7．5时水体老化速度 最快，第3天开始老化，偏碱(pH9．O)或偏酸(pH6．0)能延缓水体老化， 第4天时卅开始老化， pH 6．0的水体较pH 9．0的水体老化程度轻。底泥与水体 老化的关系：底泥能促进水体老化，底泥不灭菌的水体中，6天内COD去除率 达60．1％，高出不加底泥的水体18．6％。投菌量与水体老化的关系：投菌量为104 cf=u／ml和105 cfu／ml时COD去除效果最好，去除率分别为90。1％和91．3％，明显 高于其它处理及对照。不同溶氧水平下投菌与水体老化的关系：高溶氧下投菌能 促进水体净化，COD去除率75．9％，低溶氧下投菌会加速水体老化，在投菌后3、 4犬内水体迅速变黑，COD去除率为45．7％，与低溶氧下对照COD去除率42．1％ 相差不大，且低于高溶氧水平下对照COD去除率55．1％。 关键词绿色荧光蛋白；枯草芽孢杆菌；水体老化： 枯草芽孢杆菌B411的绿色荧光虽白标记及其水体净化作用的研究Research 枯草芽孢杆菌B411的绿色荧光虽白标记及其水体净化作用的研究 Research on Labeling Bacillus subtilis B411 with Green Fluorescent Protein and Its Application in Water Bioremediation Abstract Two sections included in this research：Firstly，constructed GFP—labeled strain of Bacillus subtilis B412．The coding sequence of咖gene was amplified through PCR from pADl23，a plasmid which contained the full—letlgth gfp gene fragment． Then the’recombinant plasmid pAXc—gfp was constructed by ligating pAXc and gfp DNA fragmems purified from PCR products．pAXc-gfp was lineafized and transformed into Bacillus subtilis B411．The lmearized plasmid was integrated into the chromosome of Bacillus subtilis B411 on／acA locus．Recombinant