毛细管电泳电化学方法检测单细胞中的谷胱甘肽和乳酸脱氢酶-分析化学专业毕业论文.docxVIP

山东大学硕士学位论文中文摘要 山东大学硕士学位论文 中文摘要 本论文主要分三部分：I．毛细管电泳电化学检测测定人单个肝癌细胞中谷胱甘 肽。Ⅱ．毛细管电泳电化学检测测定血红细胞中的乳酸脱氢酶。IⅡ．毛细管电泳电化 学检测大鼠单个胶质瘤细胞中的乳酸脱氢酶的同工酶。 I．在论文的第1部分中我们对人单个肝癌细胞中的谷胱甘肽进行了检测。在以 前的文献中，分散细胞通常使用生理盐水(PBS)．在用毛细管电泳／电化学检测时， 它会产生一个大峰，所以必须将它与被检测的谷胱甘肽进行分离。我们采用了电泳缓 冲液代替PBS来分散细胞，PBS的峰不再出现了。此外，在细胞溶膜过程中，我们 在导入溶膜溶液O．0l mol／LNaOH后，再加一5．0kV的高压，将细胞溶膜时间由文献 报道的120 s缩短至大约5 s，减少了单个细胞内GSH溶膜期间在毛细管内的径向扩 散。 Ⅱ．本论文的第Ⅱ部分对毛细管电泳电化学检测乳酸脱氢酶的方法进行了详细的 研究。我们对缓冲溶液的pH和浓度，分离电压。检测电势，两种底物的浓度等多种 因素进行了研究。确定NADH的检测条件为：电泳缓冲液，5．0×10五mol／1．,TRIS-HCI 溶液(pH 7．5)；分离电压，20．0 kV；检测电势1．00 V(vs．SCE)。乳酸脱氢酶的反 应条件为{反应缓冲溶液，5．0×10‘2mol／1．,TRIS．HCI溶液(pH9．3)，乳酸锂和NAD 的浓度分别为5．0×102 mol／L和5．0×104 mol／L的；18(2柱外反应10 rain。反应缓 冲液和电泳缓冲液采用了不同的pH值，同时保证了酶反应和检测的最佳条件。得到 LDH的检测限为17 U／L(SAV=3)，即1．10×1010 mol／L。质量检测限为2．7 nU，即 1．77 10．20tool。实验中用该方法测定了血红细胞中的乳酸脱氢酶的含量。 III．本论文的第1u部分是采用柱上酶反应的方法，对大鼠单个细胞中的乳酸脱 氢酶的同工酶进行了分离和检测。这是首次用毛细管电泳电化学检测的方法测定了单 细胞中的乳酸脱氢酶的同工酶。实验中我们采用第1I部分中研究得到的乳酸脱氢酶 最佳反应条件．进行柱上反应，并得到柱上酶反应的工作曲线。在单细胞测定过程中， 单个大鼠胶质瘤细胞被导入毛细管柱上，超声破膜10 s，加20．0 kV高压对同工酶进 行分离，然后断掉高压柱上孵育2 min，最后运行电泳并检测，成功分离并测定了单 个大鼠胶质瘤细胞中的三种乳酸脱氢酶的同工酶。 关键词；单细胞，谷胱甘肽，乳酸脱氢酶，毛细管电泳，电化学检测 山东大学硕士学位论文ABSTRACT 山东大学硕士学位论文 ABSTRACT This thesis includes three parts：I．Determination of glutathione in single human hepatocarcinoma cells by capillary electrophoresis with electrochemical detection．II． Assay of lactate dehydrogenase in human erythrocytes by capillary electrophoresis with electrochemical detection．III．Determination of lactate dehydrogenase isoenzymes in single rat glioma cells by capillary electrophoresis with electrochemical detection． In Chapter I．，capillary electrophoresis(CZE)was used detect the content of ghtathione(GS功in single human hepatocarcinoma fin-i)ceils．In the previous work of lab，physiological buffer saline(1aBS)was used to wash and suspend the cells． However,a large electrophoretic peak appears corresponding to PBS．Both peaks of PBS and GSH must be separated before detection．It was found that ifPBS was replaced by the running buffer,I-IH cells could be living 2