棉花叶皱小突变体遗传特性及相关基因表达分析-发育生物学专业毕业论文.docxVIP

山东师范大学硕士学 山东师范大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 2.4 多态性引物的筛选、数据分析及染色体定位 56 2.5 基于陆地棉茎尖转录组序列预测 miRNA 及靶基因 56 3. 结果分析 58 3.1 基于陆地棉茎尖转录组序列 genic-SSR 标记的开发 58 3.2 新标记的筛选及应用 60 3.3 基于陆地棉茎尖转录组序列预测 miRNA 的结果 63 3.4 靶基因预测及功能分析 65 4. 讨论 66 4.1 基于陆地棉茎尖转录组序列开发 genic-SSR 标记及应用 66 4.2 预测陆地棉茎尖转录组中的 miRNA 及靶基因 68 参考文献 72 攻读硕士期间发表文章及专利 76 致 谢 77 棉花叶皱小突变体的遗传特性及相关基因表达分析 中文摘要 突变体作为一种重要的种质资源，在作物遗传学和育种研究中发挥着重要作用。本 研究以实验室前期鉴定的棉花叶皱小突变体为材料，从形态、生理和分子水平对该突变 体产生的机制进行解析，对棉花叶形态建成及叶片的发育机制进行探讨。 对棉花叶皱小突变体的形态、遗传、生理特性进行了研究，结果发现（1）成熟期 棉花叶皱小突变体株高明显矮于野生型，节间距离缩短，但果枝数目增多，且越接近主 茎茎尖的叶片叶皱小表型越明显。（2）突变体的上表皮细胞数目明显少于野生型，细胞 变大；下表皮数目却明显多于野生型，细胞多呈狭长不规则状，同时下表皮的气孔数目 较多。（3）在胚珠发育的早期，突变体的胚珠形态、数目与野生型一致，但在成熟后 期突变体获得的种子数目显著少于野生型。经卡方检验缺失数目占野生型种子数目的 1/4，这一结果与本实验室前期初步推测棉花叶皱小突变体是杂合个体，突变基因为显性， 纯合突变基因具有致死效应的结论一致；通过对不同生长时期的胚珠进行石蜡切片观察， 初步推测纯合突变基因型的胚珠在受精 8 天后逐渐死亡。（4）叶皱小突变体的净光合 效率、气孔导度、蒸腾速率明显高于野生型，叶绿素浓度值 a/b 高于野生型，且突变体 茎尖中的生长素含量明显低于野生型。（5）叶皱小突变体的茎尖分生组织明显小于野 生型，虽呈现出经典的原套-原体结构，但是突变体茎尖分生组织中原套具有 5 层细胞， 是正常株的 2-3 倍，整个生长点发育滞后。 为了进一步探究棉花叶皱小突变体产生的机制，使用高通量测序技术，以突变体及 其近等基因系的茎尖为材料，进行转录组测序获得 Unigene 序列，以此为参照序列进行 数字表达谱分析，筛选同一生长时期叶皱小突变体与野生型茎尖生长发育的差异基因。 通过数字表达谱分析共筛选出 750 个差异基因，其中上调表达基因 222 个，下调表达基 因 528 个；KEGG 分析，与生长素合成有关的色氨酸代谢途径，以及与生长素运输与信 号转导相关的植物激素信号转导、ABC 转运、内吞和泛素介导的蛋白水解差异基因富 集显著。从这些途径中挑选出 10 个相关基因，利用 qRT-PCR 在叶皱小突变体根尖、茎 尖中进行验证，其表达量与数字表达谱结果一致。为了验证这 10 个基因与叶皱小突变 体的产生是否相关，进一步利用 VIGS 技术抑制其在野生型中的表达，结果发现在野生 型中沉默掉 ABCB19 基因出现与叶皱小突变体相似的表型。这一结果进一步证实叶皱小 突变体产生与生长素的密切相关。 另外，本研究还基于陆地棉（Gossypium hirsutum L.）茎尖转录组测序得到 Unigene I 万方数据 万方数据 序列进行 genic-SSR 标记开发及 micorRNA 预测，开发了 1569 对 genic-SSR 引物，并对 这些引物在棉属不同种间进行筛选与评价，最终挑选 5 对利用本实验室构建的连锁图谱 合作图群体进行连锁分析，其中 4 对成功连锁到本实验室构建的遗传图谱上，为棉属遗 传作图、性状关联分析提供了更多标记选择。基于茎尖转录组测序得到 Unigene 序列， 我们获得 10 个保守的 miRNA 前体，包括调控植物叶片发育的 miR166a，miR319a， miR390d，并在陆地棉茎尖转录组序列中预测了他们的靶基因。 关键词：陆地棉，叶皱小突变体，生长素，VIGS，genic-SSR，microRNA 前体和靶基 因 分类号：Q78 II PAGE IV PAGE IV 万方数据 Genetic and Molecular Characterization on a Cotton Mutant with Small Crinkled Leaves Abstract Mutants ar