氯化三丁基锡的体外胚胎毒性及其机制探讨-卫生毒理学专业毕业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包 含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共 同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名：淞六 日期： 扣午年6月 y日 关于学位论文使用授权说明 本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论 文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文； 学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。 作者签名鼋帱文导师签名：廿、峰日期：扣牛年(月罗日 ＼ ————!堕生塾!!!堡垄 ————!堕生塾!!!堡垄 堕兰盔堂堡圭兰垡堡苎 氯化三丁基锡的体外胚胎毒性及其机制探讨 研究生：曾怀才 导师：陈锋 摘 要 目的： 观察环境污染物氯化三丁基锡(tributyltin chloride，TBTCl)的体外胚胎毒 性，初步从细胞、分子水平探讨其作用机制，为进一步认识TBTCl对机体的远 期危害及进行氯化三基锡安全性评价提供实验依据和理论基础。 方法： 将孕8．5天的昆明种小鼠脱颈处死，分离胚胎，采用全胚胎培养技术(whole embryo culture，WEC)，将其置入含有不同浓度TBTCI(0．00，O．02，O．05，O．10，O．20, 0．40mg／L)的大鼠即刻离心血清(immediately centrifugal sertlln，ICS)中旋转培养 48小时，经光学显微镜、解剖显微镜、中性红活体染色、病理学和免疫组织化 学等观察TBTCl对体外培养小鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化以及胚胎和 卵黄囊(visceral yolk sac，VYS)胰岛素样生长因子一II(insulin—like growthfactor ．II，IGF．II)和诱生性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)蛋 白的影响；应用分光光度法观察TBTCl对胚胎组织谷胱甘肽(glutathion，GSH) 含量、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase．SOD)活性的影响。 结果： 1。TBTCI能导致胚胎体位、心脏、后脑、中脑、前脑、听觉系统、视觉 系统、鳃弓、前肢芽、后肢芽评分下降，且这种下降趋势呈浓度依赖性改变。 当TBTCl浓度达到0．4mg／L时，体位、心脏、后脑、中脑、前脑、听觉系统、 视觉系统、鳃弓、前肢芽、后肢芽评分分别由溶剂对照组的5．Oa：0．0、5．0a：0．0、 5．0i0．0、4．9-*-0．2、5．0-a：0、4．9-士0．2、5．0士0．0、2．9士0．2、2．6士O．5、1．O士O．6下降到 3．O士O．4、2．8士O．6、2．9-a：O．3、2．9-a：O．3、2．9-a：O．3、2．8土0．4、2．8士0．3、1．5士0．7、1．3士0．6、 O．O-a：O．0。TBTCl诱导的胚胎形态异常主要表现为：头部形态异常(小头)、嗅 研究生姓名曾怀才 研究生姓名曾怀才 南华大学硕士学位论文 觉系统发育异常、听觉系统发育异常、鳃弓发育异常、心脏发育异常(心小、 心包积液、停留在心管期)、前肢芽小或无、无后肢芽。 2．低于0．2mg／L TBTCl染毒组，卵黄囊细胞形态与溶剂对照组比较，差别 不明显；O．4mg／LTBTCl能导致胚胎脏层卵黄囊内皮层细胞结构紊乱，排歹0不规 则，细胞失去极性，出现变性、肿胀，胞浆内出现空泡，间质层变薄且层内血管 和血岛减少，红细胞减少或无。 3．O．02mg／L TBTCl不影响卵黄囊IGF—II表达，当TBTCl浓度为O．05mg／L 时，卵黄囊IGF．II表达下降，且这种下降趋势呈浓度依赖性改变。当TBTCl浓 度为O．4m∥L时，卵黄囊IGF—II不表达或呈可疑阳性； 0．05，O．1，0．2，0．4mg／L TBTCl均能诱导卵黄囊间质层细胞和胚胎心脏组织中iNOS蛋白呈阳性表达。 4．TBTCl能抑制胚胎组织SOD活性，同时引起MDA含量升高和GSH含 量下降。当TBTCl浓度达到O．4mg，L时，SOD活性和GSH含量分别由对照组的 77．6土2．7U／mgprot，67．9士4．7mg／gprot下降到62．9：k2．1 U／mgpr