绿色木霉菌代谢物的分离纯化及其抑菌活性的研究-农产品加工及贮藏工程专业毕业论文.docxVIP

摘要 本文以常见的绿色木霉菌为材料，对其代谢物进行了细致的研究，主要内容 包括对其抑菌活性，培养基的优化，代谢物的稳定性，代谢物的分离纯化，分离 纯化后单体化合物的抑菌活性的研究，旨在开发一种高效、稳定的生物制剂，来 代替化学杀菌剂在果蔬采后病害中的防治。 研究了绿色木霉菌对单糖、二糖、多糖以及有机氮源、无机氮源和氨基酸的 利用率。结果发现，在碳源中，绿色木霉对半乳糖的利用率最高，对照糖的利用 率最低，对乳糖、海藻糖、木糖、果糖、甘露糖、葡萄糖等均有较好的利用率; 对于氮源，绿色木霉菌对有机氮源和氨基酸的利用率要显著高于无机氮源。 在土豆含量、发酵天数、装液量等单因素试验的基础上，根据 Central Composite Design 试验设计原理，应用响应面分析法研究各因素的显著性和交互 作用的强弱，对绿色木霉菌代谢抑菌物质的培养条件进行优化。结果表明，绿色 木霉菌代谢抑菌物质的优化培养条件为土豆含量 20%、发酵天数 4.5d、装液量 67mL/250mL，实际抑菌率达到 83.03%，与理论预测值 81.89%的绝对误差为 1.14%。 在绿色木霉菌培养基和培养条件优化的基础上，研究绿色木霉代谢物对根 霉、黑曲霉、芒果炭殖菌、荔枝炭殖菌、尖包镰刀菌及青霉菌等五种果蔬采后病 原菌的抑制作用，发现其对芒果炭殖菌的抑制作用最强，抑菌率达到 84.32%。 在对绿色木霉代谢物稳定性的研究中发现，其对热、光、微波较为稳定;pH6-7 时稳定;Cu2+、Fe3+对代谢物的影响较大，防腐剂、氧化剂、还原剂在一定浓度 范围内对其影响不显著。 对绿色木霉代谢物进行溶剂萃取，并分别对石油迷相、乙酸乙醋相、正丁醇 相的抑菌活性进行了研究。结果发现，抑菌活性大小为:石油迷相乙酸乙醋相 正丁醇相。 石油迷部分采用气质联用仪分离出29个化合物，鉴定出其中的5个化合物: 2,3-二甲基-2-戊醇、按叶醇、苯乙醇、邻苯二甲酸二异丁醋、Sohirnone B。本文 采 用 多 种 常 压 柱 层 析 ， 包 括 正 相 硅 胶 、 反 相 Rp-18 硅 胶 、 葡 聚 糖 疑 胶 sephadexLH-20，从绿色木霉代谢物的乙酸乙醋相中分离了三个化合物，并运用 NMR 等 光 谱 学 方 法 对 其 进 行 了 鉴 定 : 2,4- 己 二 烯 酸 乙 醋 、 Bisvertinolone 、 Viridenepoxydiol。 对分离出的 2,4-己二烯酸乙醋、Bisvertinolone、Viridenepoxydiol 三个单体化 合物进行了抑菌活性的研究。发现 2,4-己二烯酸乙醋、Bisvertinolone 化合物对荔 枝 炭 殖 菌 均 有 抑 制 作 用 ， Viridenepoxydiol 没 有 ; Bisvertinolone 的 MIC 为 I II II 5.95mg/mL。 关键词:绿色木霉菌 代谢物 发酵 稳定性 分离 纯化 抑菌 PAGE PAGE IV Abstract Choose Trichoderma viride as material,study intensively on its metabolites. Include the research on its antifungal activity, medium of optimization,metabolitess stability,isolation and purification of metabolitess,antifungal activities of compounds.We need to develop a kind of steady efficient and safe biologicals to fright postharvest diseases of fruits,in stead of chemistry germicides. The study on the utilization ratio of carbon source and nrogen source,showed that about carbon source,Trichoderma viride had highest utilization ratio of galactose,lowest utilization ratio of sucrose and moderate utilization ratio of lactose, trehalose,xylose,fructose,mannose,glucose;about nitrogen source,Trichoderma viride