麻醉药对大鼠海马锥体神经元钠通道电流的影响及其机制-麻醉学专业毕业论文.docxVIP

麻醉药对大鼠海马锥体神经元钠通道电流的影响及其机制 麻醉药对大鼠海马锥体神经元钠通道 电流的影响及其机制 孛文摘要 弼 蟊 全麻原理楚麻醉学最重癸的基本理论之一，德全麻药俸蕉的确切棱I镅 楚今不明。一般认为吸入全麻药的作用机制较为复杂，其中可能包涵静脉 全麻药的作最视翱。不管吸入全麻药宏鬣秘徽蕊承平的作震部位如衙，现 在可以肯定分子水平的作用部位是在神经细胞膜。越来越多的证据表明吸 入麻醉药发挥效应的部位是缫臆膜上的离子逶道。 在诸多的离子通道中，麻醉药对13．一乙酰胆碱受体(nAChR)和r一氨基 丁酸度受体(GABA。歉)通遘影嚷的研究最多，因实验条件翻药物裁量簿嚣 索不同，研究结果不一。一般认为nAChR通道不是全麻药作用的主要靶 位。尽管GABA。受体透道燕丈家公认豹全麻药主要靶位之一，在其蕊臻麻 醉浓度主要增强GABA对该受体通道的效应，但融发现许多用对该通道作 鲻不能解释的现象，敬全麻药对其它兴奋性离子遥道的作蔫邑受蓟鬟视。 在中枢神经系统(CNS)主要的兴奋性离子通道中，钠通道为主要的兴奋性 电压}-】控登离子通道，是可兴奋缨魏产生动作电彼及传释神经摔凌的关键 部位和决定因索，虽以前的实验发现枪乌贼巨轴突模型的钠通道对全麻药 不敏感，僵磊聚的研究证臻l瓶床浓度的全麻药对鬣脑钠遵遂、肺泡ll登缅 胞钠通道及心肌细胞钠通道都有显著的抑制作用，且遵循Meyer—Overton 规则。因茈，全麻药对脑钠通道的影响以及此影响在全麻串的地位值得研 究。本课题分三部分研究异丙酚(静脉麻酩药)、异氟醚(吸人麻醉药)和利 多卡因(局部麻醉药)对急健分离的CNS铺通道的影响。 第一部分 第一部分 异丙酚对大鼠海马锥体神经元钠通道电流的影响 材料和方法 选用10～14d SD大鼠，雌雄不拘，体重20—309，由徐州医学院实验动 物中心提供。将实验大鼠快速断头，置于0～4℃氧饱和的人工脑脊液 (ACSF)中分离出海马，手工切成约5001山m厚的脑片。将脑片放人孵育槽 中用ACSF漂浮孵育60rain，连续通以95％O：+5％CO：维持pH在7．35～ 7．40。采用二步酶消化法，分别用10 mL的ACSF配成0．05％的Trypsin和 0．05％的Pronase，相继在孵育槽内酶解(32E，各30 min)。酶解后的脑片 冲洗2次后继续用ACSF孵育。实验时每次取1片脑片放入盛有ACSF约1 mL的小玻璃杯中，先后用尖端热处理的直径为400ixm和150斗m左右的 Pasteur吸管轻轻吹打，经400目钢网过滤到细胞灌流槽内，放在倒置显微 镜上静置15～20min让细胞贴壁，用细胞外液灌洗3次后作全细胞膜片钳 记录。 在显微镜下选择合适的锥体神经元作为实验对象，用硬质有芯玻璃毛 坯管二步拉制记录电极，用微电极操纵器将电极缓慢推向细胞，当电极尖端 贴住细胞膜后轻轻吸引使之封接，当封接阻抗大于lGQ时，负压破膜，补偿 电容电流和串联阻抗形成全细胞状态。用EPC一9膜片钳放大器在室温 (24～26℃)下记录钠电流，电刺激脉冲的输出及电信号的采入均通过计算 机由商用软件Pulse 8．02来完成，经数字化处理后贮存于计算机硬盘。 实验分为7组，异丙酚(propofol，Pro)按加入在细胞外液中的浓度(10、 30、50、100p。mol／L)对应分为P10lo组、Pr030组、Pr050组和Pr01∞组，脂肪乳剂 (intralipid，ILl))按Pr050组和Proi00组同样的浓度对应为IL‰组和ILP。00组， 对照组灌流给药时仍用细胞外液。每组6个细胞，分别记录给药前、给药后 2 rnin及冲洗后2 rain的钠通道电流变化。抑制程度以最大内向电流的减 少来计算，用与基础对照值的百分比表示。 ·2· 结 结 果 对照组、I珊岛组和lip。∞组的峰钠电流下降率分别为4．2±3．2％、5．7 ±4．6％和4．3±3．1％，差别无显著性意义(P0．05)；异丙酚抑制峰钠电 流的程度与浓度呈正相关(r=0．993，P0．01)，Pro。o组、Pr030组、Pro如组和 Pro，∞组分别抑制峰钠电流为14．4±8．7％(P0．05)、43．2-4-8．8％(P 0．01)、67．2±18．1％(P0．01)和85．I±14．9％(P0．01)，IC50为32．5 Ⅳn0L／L。 讨 论 全麻药对中枢神经钠通道的影响虽有研究报道，但使用的都是人工表 达的ⅡA—l型脑钠通道，缺乏13亚单位的调节作用。我们采用酶消化法， 急性分离出来的含有完整钠通道的大鼠海马锥体神经元的峰钠电流(平均 3～4nA)比人工表达的ⅡA一1型细胞(平均1～2hA)的大，阈电位和峰电 位也比人工表达的细胞更负，提示分离细胞的钠通道更完整、功能钠通道更 多、激活和