绵羊骨骼肌特异表达miRNA前体多态及其表达分析-农业推广专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Detection and analysis of polymorphism at the Sheep skeletal muscle-specific miRNA among different Flocks A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Professional Master of Agriculture By Song Guangchao (Agricultural Extension Master) Dissertation Supervisor:Prof. Liu Shou-ren Prof. Gan Shang-quan May, 2015 万方 万方数据 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所 知，除文中已经注明引用的内容外 ，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果 。 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意. 研究生签名:听起 时间:护J!年 d月? 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向 国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版 .有权将学位论文在学校图书馆保存并 允许被查阅.有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论 文的标题和摘要汇编出版.保密的学位论文在解密后适用本规定。 研究生签名: 你 t/i( 导阳俨)(;- 时间: )01ζ年  6月 1 日 时间:六j? 年归俨 万方数据 万方数据 摘要 提高绵羊的产肉性能在绵羊养殖业中具有重要的生产意义。据研究表明，miRNA 在骨骼肌发育过程中起到重要的调控作用。而 miR-1,miR-133 和 miR-206 三种 miRNA 在骨骼肌和心肌中特异表达，与肌肉发育息息相关。 鉴于此，本论文以 miR-1,miR-133 和 miR-206 及其前体为研究对象，从以下几个方 面探究其在绵羊骨骼肌发育中的表达规律及生物学作用： 1.采集发育时间为 45 天、65 天、85 天、105 天和 125 天的绵羊胚胎，提取后肢骨 骼肌样品并提取 RNA，利用荧光定量 PCR 技术研究 miR-1,miR-133 和 miR-206 在绵羊 胚胎阶段的不同时期以及成年后的表达规律。 2.采用 PCR-SSCP 及测序检测 miR-1,miR-133 和 miR-206 前体序列在不同产肉性能 的四个绵羊品种（特克赛尔羊、阿勒泰羊、中国美利奴羊和湖羊）中的多态性，发现 m iR-133 前体 g位点存在一个 AG 突变，该位点存在 AA、AG、GG 三种基因 型。并对该突变位点在不同品种绵羊群体中的基因频率进行生物统计学分析，证明该位 点 G 等位基因频率在特克赛尔羊群体中远高于 A 等位基因，其差异显著（p0.5）。二 级结构预测分析表明该突变可以提高 miR-133 前体基因二级结构的稳定性。 3.将包含该突变位点的 miR-133 前体基因序列构建表达载体，转入 Hela 细胞，在细 胞水平验证其前体序列的改变对 miRNA 成熟加工的影响。实验证明包含 GG 基因型的 基因片段能够显著提高细胞内 miR-133 的表达量。 本论文的研究成果可在分子水平初步阐明 miR-1,miR-133 和 miR-206 的表达量及其 前体序列的改变与绵羊骨骼肌生长发育的相关性，为绵羊骨骼肌生长发育的调控及优良 肉羊品种的培育提供理论基础及手段，对提高绵羊的产肉性能和肉羊育种产生积极地推 动作用。 I Abstract Sheep husbandry plays an important role in breeding industry. Sheep farming can get a variety of economic benefits,in which meat performance is the most important economic traits. Different sheep species have different meat production performance. Molecular mechanism of muscle development have carried out a lot of research. Some of the genes involved