毛细管电泳检测AmpC酶-药理学专业毕业论文.docxVIP

中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文 中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文 毛细管电泳检测AmpC酶 摘要 抗生素的广泛应用，使临床常见细菌的耐药性曰益加重，AmpC酶的产 生是引起临床常见肠杆菌耐药的最重要耐药机制之一。近年来研究表明， 革兰阴性杆菌不仅产生染色体介导的AmpC酶，还产生与之同源的质粒介导 的AmpC酶，导致因此而产生的耐药菌的广泛传播，引起临床治疗的困难。 AmpC酶的产生已引起临床医生的关注。因此检测AmpC酶，对于细菌的耐药 性机理的研究及指导临床选择抗生素，从而能在第一时间杀灭耐药菌等方 面都有着非常重要的意义。对于AmpC酶目前尚无国际公认的标准检测方法。 因此寻找准确、快速、简便的检测方法，迫在眉睫。 获得纯化的AmpC酶是进行一切相关研究的先决条件。本研究分离纯化 AmpC酶并以此为标准物，建立毛细管电泳检测AmpC酶的新方法。 采用三维提取实验从临床感染性标本中筛选三维提取实验阴性和阳性 菌株，并进行常规药敏实验。 通过与低温冻融法相比较，最终采用超声破碎法裂解细菌，并运用离 子交换层析等技术对酶进行分离纯化，并对纯化酶进行了相关的理化特性 研究，证实其具有典型的理化特性：采用SDS法测定酶分子量为43025， 采用等电聚焦电泳法测定酶等电点为9．2，酶的水解活性检测～AmpC酶对 头孢唑啉的水解活性远大于头孢他啶。 摸索出毛细管电泳检测AmpC酶的适宜条件，即采用pH9．5浓度为 中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文20retool／1硼酸盐缓冲液，选择毛细管有效长度为50cm的非涂渍石英管，温 中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文 20retool／1硼酸盐缓冲液，选择毛细管有效长度为50cm的非涂渍石英管，温 度20。C，电压20kg，电流100 u A，电泳时间6分钟，进样时间5秒，检 测波长214nm，建立了毛细管电泳检测AmpC酶的新方法，并用于细菌酶粗 提物的检测。并从以下几方面进行了研究。回归方程相关性分析： A=11 37．059+287 384．922C(A为峰面积，C为酶浓度)，r=0．999，P0．01； 回收试验：高值平均回收率为96．30％，低值平均回收率为91．31％。重复性 实验：进行日内及日间重复性分析，日内变异为5．6％，日间变异为9．5％； 干扰实验：以ESBLs阳性菌株作为干扰物质进行干扰实验，证实ESBL酶对 毛细管电泳检测AmpC酶无干扰；与三维提取试验法相比较：毛细管电泳法 灵敏度远高于三维提取试验。 !里堕堂翌兰堕!曼塑塑垦翌查堂堡主兰堡堕苎Detect !里堕堂翌兰堕!曼塑塑垦翌查堂堡主兰堡堕苎 Detect AmpC B—lactamase with capillary electrophoresis Abstract With the extensive application of antibiotics，the resistance of clinical common bacteria has became serious increasingly．The generation of AmpC is one of most important mechanisms of clinical enterobacterial resistance． Recent studies suggested that Gram negative bacillus carl not only generate chromosome-mediated AmpC， but also produce homogenous plasmid-mediated AmpC， which lead to the widespread of resistant bacteria and difficulties of clinical therapy．The generation of AmpC has gave rise to the concerns of doctors．Therefor，the detection of AmpC has great significance in studying resistance mechanisms， and instructing antibiotic selection to kill resistant bacteria in first time．To date．there isn’t international accepted standard detection method for Ampc．Thus， it is urgent to find an a