黄酮及其磷酰化产物与ctDNA弱相互作用的研究及人肺癌组织中热休克蛋白70的纯化-分析化学专业毕业论文.docxVIP

郑州，“鼻萄nb掣啦诗文中文摘要 郑州，“鼻萄nb掣啦诗文 中文摘要 核酸和蛋白质一样，都是生命活动中的生物信息大分子，作为“遗传大分子”的核酸在生 物体的生长、繁殖、遗传、变异和转化等生命过程中起着决定性的作用。许多分子能与核酸 发生相互作用。破坏其模板作用，使核酸链断裂，进而影响基因调控和表达功能。因此，有 关核酸与其探针化台物即靶向分子相互作用的研究，一直是受到人们关注的研究领域，研究 小分子特别是一些具有抗肿瘤、抗病毒等药物与核酸的相互作用，对于了解它们的作用机理， 药物体外筛选、致癌物的致癌机理的研究都有非常重要的意义。黄酮类化合物是一类存在于 多种植物中的多酚化合物。研究发现它们具有广泛的药物活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、 抗炎等活性。 论文第一部分用紫外、荧光法分别研究了7-羟基黄酮、5,7羟基黄酮及其磷酰化产物 (磷酰化7．羟基黄酮、磷酰化5，7一二羟基黄酮)在液态环境中与小牛胸腺DNA(ctDNA)的弱相 互作用情况。结果显示；7-羟基黄酮、5，■二羟基黄酮及其磷酰化产物均能在一定的浓度范 围内与ctDNA发生弱相互作用，但与黄酮相比，磷酰化产物对ctDNA更具亲和力。根据文 献求得列弪基黄酮、5，7羟基黄酮及其磷酰化产物与ctDNA结合的平衡常数，分别为： 7兹基黄酮与ctDNA结合的平衡常数为0．865x105 LImol；磷酰化7兹基黄酮与ctDNA结合 的平衡常数为1．$2x105 L／tool；5,7．二羟基黄酮与ctDNA结合的平衡常数为1．40xl旷Lhnol： 磷酰化5,7．二羟基黄酮与ctDNA结合的平衡常数为9．32x105 L／tool。根据Stcm-Volmcr方程 算出不同温度下7掘基黄酮、5’7-二羟基黄酮及其磷酰化产物对ctDNA-EB体系的荧光猝灭 常数分别为；7-羟基黄酮对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数为，江℃=601 L／tool。舄7℃--547 L ／moh磷酰化7掘基黄酮对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数为Kz5℃=1381 LAnol。I岛rc=1253 L，mol；5,7羟基黄酮对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数为x∞=2576L／tool，K．：=2238 L ／moh磷酰化5’7．二羟基黄酮对ctDNA-EB体系的荧光葬灭常数为K∞=30860 L／mol， Ka7c=27760 L／mol。实验数据证明随着温度的升高，”§基黄南、5,7-二羟基黄酮及其磷酰 化产物对cCDNA-EB体系的荧光猝灭常数降{氐，说明它们对ctDNA-EB体系的荧光猝灭为静 态猝灭，7-羟基黄酮、5,7-=羟基黄酮及其磷酰化产物与ctDNA问形成了复合物。本部分论 文还根据Scatchard方程求得7，羟基黄酮、磷酰化7-羟基黄酮、5，7-=羟基黄酮及磷酰化5,7- 二羟基黄酮存在时，核苷酸上每一位点固有的结合常数K分别为t 2．07xi04 LImol、3．19X104 L／mol、2．94x104 Llmol、5．31x104 L／tool；每个核苷酸上的成键位点数n分别为：54、O．45、 0．37、0．29。另外还根据紫外及荧光数据初步推断出在实验条件下7-羟基黄酮、磷酰化7-羟 i 郑州犬孽嘎士掣啦论文基黄酮、5,7一羟基黄酮及磷酰化5,7羟基黄酮与ctDNA间可能是沟槽式结合方式。 郑州犬孽嘎士掣啦论文 基黄酮、5,7一羟基黄酮及磷酰化5,7羟基黄酮与ctDNA间可能是沟槽式结合方式。 由实验结果可以得出以下结论： 1．5,7羟基黄酮比7．羟基黄酮与ctDNA结合的平衡常数大，说明随着羟基的增加与 ctDNA的结合越强l磷酰化5,7羟基黄酮比磷酰化7掘基黄酮与ctDNA结合的平衡常数 大，说明ctDNA与磷酰化黄酮的亲和力大小与磷酰化基团的多少有关。 2．与7．羟基黄酮、5,7．-羟基黄酮相比。它们的磷酰化产物对ctDNA更具亲和力。 3．本部分论文的研究为7搬基黄酮、5,7羟基黄酮及磷酰化7强基黄酮、磷酰化5，7- 二羟基黄酮的抗肿瘤活性及抗肿瘤作用机理提供了依据。 热休克蛋白∞趼)是生物体(或离体的培养细胞)在不良环境因素作用下所产生的一组特 殊蛋白质，它能保护机体(或细胞)不受或少受伤害。热休克蛋白作为分子伴侣参与蛋白的合 成、折叠、装配、运输和降解。对liSPs深入研究认为HSPs的表达与肿瘤的发生、发展、 治疗以及预后有关。研究发现黄酮类化合物具有许多潜在的药用价值，其中抗肿瘤作用是一 个研究热点。已有相关报道证明黄酮类化合物的抗肿瘤作用与HSP70的表达有关。 论文第二部分应用快速蛋白液相色谱四IJ回系统建立了分离和纯化人肺癌组织中 HSP70的分离方法。组织经蛋白裂解液裂解后，用ConA-Sepharose亲和层析和DEAE阴