慢性应激对大鼠行为及脑源性神经营养因子在前额叶表达的影响-应用心理学专业毕业论文.docxVIP

采用青年雄性Wistar大鼠15只，体重210—2409。由中国医科大学实验动物中心提供。 采用青年雄性Wistar大鼠15只，体重210—2409。由中国医科大学实 验动物中心提供。 2．主要试剂 兔抗大鼠BDNF多克隆抗体，生物素标记的山羊抗兔IgG，SABC(链霉 素过氧化物复合物)免疫组化试剂盒，DAB显色剂，以上试剂均购于Boster 公司。 3．主要实验仪器 YSD-4G型药理生理实验多用仪(安徽蚌埠医学院无线电二厂)；Meta Morph／Cool Snap＆／Ax70计算机图像分析系统。 二、实验方法 1．动物分组 大鼠适应环境一周后采用旷场分析法测定行为并称重。然后随机分为 对照组5只和实验组10只。 2．应激过程 实验组lO只大鼠，分笼喂养，每笼1只。实验第1～21天，接受各种不 同的应激：电击足底、冰水游泳、摇晃、夹尾、热应激、禁食、禁水。每天给予 1种刺激，每种刺激累计使用2～3次。 对照组5只大鼠，放入一笼中群养，实验第1～2l天，不给任何刺激。 3．灌注取材与切片 实验第22天杀死所有大鼠．无论实验组还是对照组大鼠于第22天处 死前再次测定行为并称重。每只大鼠用戊巴比妥钠行腹腔麻醉后，经左心 室快速灌注37℃生理盐水200ml，继之灌注4℃的4％多聚甲醛溶液300ml， 然后剥离脑，后固定48小时以上；梯度乙醇脱水，石蜡包埋后，行冠状切片。 4．免疫组化法检测BDNF蛋白 采用免疫组化ABC法检测切片中的BDNF蛋白。 5，图像分析 每只大鼠选取前额叶完好的切片1张，在计算机图像分析系统上分别 测量双侧前额叶内BDNF阳性细胞的平均光度值。 6．统计学处理 采用SPSSll．5统计软件对数据进行分析。 ·2· 实验结果1．体重和开场行为评定 实验结果 1．体重和开场行为评定 实验前实验组与对照组在体重和开场行为指标上无差异。2l天后，实 验组与对照组相比，体重明显下降、中央格停留时间延长、水平穿越格数减 少、直立次数减少、修饰次数减少、粪便粒数增多。 2．前额叶神经元细胞的光镜下表现 光镜下观察，正常对照组大鼠前额叶皮质中，BDNF阳性细胞表达较 强，细胞排列密集，着色深，被染成棕黄色，免疫阳性颗粒主要分布于胞桨和 细胞膜表面，有的有较长的突起。实验组大鼠前额叶皮质阳性细胞数量明 显减少，且多数细胞呈空泡状，胞桨着色很浅。其中以右侧区明显。 3．前额叶神经元中BDNF的表达 通过比较实验组和对照组BDNF表达的平均光密度，可以看出，在左右 PFC区正常组大鼠BDNF的光密度均高于实验组。正常大鼠左右PFC区 BDNF表达无差异。经过21天应激后，实验组左右PFC区的BDNF表达均 低于正常对照组(P0．O】)，但右PFC区显著，同应激后左PFC具有显著差 异。 讨 论 到目前为止，动物抑郁模型制作方法一般有：药物诱发的抑郁动物模 型、获得性无助模型、慢性应激模型、孤养模型、切除双侧嗅束模型。但这些 模型单独用于研究尚有难以克服的假阳性和假阴性反应，因此有人主张同 时联合应用其中的几种模型，可能会提高实验结果的可行性。另外，不同抑 郁模型的制作方法其应激导致抑郁发作的病理生理机制各异。既往的一些 研究大多采用单纯的物理应激方法来制作抑郁症模型，但物理应激不能很 好的模拟抑郁症病人的心理社会应激，因此本实验综合了慢性应激(物理 应激)和孤养(心理应激)两种经典模型，利用长期不可预见的中等强度的 不良应激，造成分养动物的抑郁状态，这在抑郁症模型的制作方面是个有益 ·3· 的探索。评价一个抑郁症模型的制作是否成功主要依据动物在行为上的变化， 的探索。 评价一个抑郁症模型的制作是否成功主要依据动物在行为上的变化， 旷场行为分析是一种检测大鼠在新异环境中的探究行为、紧张恐惧程度、对 新环境的警觉性、适应性以及认知能力的方法。本模型中动物经2l天慢性 综合性应激后活动明显减少、紧张程度增加、兴趣丧失、认知能力减退，这些 表现与抑郁症患者所表现的精神运动性抑制、兴趣的改变有很大程度的相 似性。从大鼠体重的变化来看，经过21天慢性应激后大鼠体重较对照组明 显减轻，这与临床抑郁症病人的体重变化相符合。综上所述，表明本实验中 大鼠抑郁症模型的制作是成功的。 生物在生存过程中会面临各种各样的刺激，并作出反应。人在应激时， 机体需要调动各种代偿机制去应对危机，并引起一系列的生理生化改变。 随着应激过程的延长，体内尤其是中枢神经系统内的系列化改变可导致负 面效应。由于伦理道德的要求与技术条件的限制，临床研究尚无法与动物 实验结果进行全面的比较，从目前积累的两方面的资料对比来看，应激反应 最主要的特征是HPA轴的激活，以及糖皮质激素(GC)的增加。心理应激 源发挥作用需要经过认知和评估，前额叶皮质在认知和评估心理应激源中 起着