毛细管电泳在多肽药物有关物质分析中的应用研究-药物分析学专业毕业论文.docxVIP

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  • 2019-05-11 发布于上海
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毛细管电泳在多肽药物有关物质分析中的应用研究-药物分析学专业毕业论文.docx

万方数据 万方数据 烟台大学学位论文原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明: 所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工 作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体 已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已 在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名: 日期: 年 月 日 学位论文使用授权说明 本人完全了解烟台大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即:按照学校 要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存学位论文的印刷本和电子版, 并提供目录检索与阅览服务;学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保 存论文;在非保密的论文范围内,学校可以公布论文的部分或全部内容。 (保密论文在解密后遵守此规定) 论文作者签名: 导师签名: 日期: 年 月 日 摘要 多肽药物具有生物活性强、疗效好、毒副作用低、用量少等特点,现已成为药 物研发的热点。多肽药物在合成及贮存过程中会产生一些杂肽,包括非对映异构体、 乙酰化产物、去甲酰胺产物等。这些杂质影响产品的质量与安全,需要采用合适的 方法对其进行监测。毛细管电泳具有分析速度快、分离效率高、样品用量少、消耗 少、操作简便、分离模式多等优点,已成为分离蛋白多肽药物尤其是结构相似的蛋 白多肽的强有力的手段。本论文主要以艾塞那肽和戈舍瑞林为研究对象,对毛细管 电泳在多肽药物有关物质分析中的应用进行研究,结果表明毛细管电泳在多肽药物 有关物质分析中具有潜在的应用价值。本论文实验主要由三大部分组成: 1. 毛细管区带电泳法测定艾塞那肽纯度及其在稳定性研究中的初步应用。 实验建立毛细管区带电泳法测定艾塞那肽纯度,并将其应用于艾塞那肽稳定性 研究。实验采用未涂层熔融石英毛细管(48.5 cm × 50 μm,有效长度 40 cm),从运 行缓冲液 pH 及浓度、分离电压、温度多个角度进行优化,并加入乙腈添加剂改善柱 效和分离度。最终确立电泳条件为:运行缓冲液为 200 mmol·L-1 磷酸二氢钠-磷酸 氢二钠溶液(pH 6.2;含 15%乙腈),分离电压为 20 kV,温度 25°C,检测波长 214 nm, 压力进样 5 kPa×10 s。结果表明艾塞那肽在 0.05~4.0 mg·mL-1(r=0.9999)范围内线 性关系良好;检测限为 3.3 μg·mL-1,定量限为 8.0 μg·mL-1;主峰迁移时间与纯度的 日内、日间精密度均小于 2.0%。该方法与 HPLC 法比较,纯度测定结果基本一致, 本法分离效果更好,分析时间缩短,能有效检查艾塞那肽的纯度。该方法可用于艾 塞那肽的质量控制和稳定性研究。 2. 胶束电动毛细管色谱法测定戈舍瑞林有关物质。 实验建立胶束电动毛细管色谱法对戈舍瑞林有关物质进行分析,成功将戈舍瑞 林及结构相似的 8 种有关物质进行分离。在胶束电动毛细管色谱中,使用了新的添 加剂组合(CTAB、β-CD 和己烷磺酸钠)来改善分离效率,将胶束、环糊精以及离 子对试剂与分析物综合作用,相互竞争制约,使各分析物都获得较好的分离效果。 实验采用未涂层熔融石英毛细管(48.5 cm × 50 μm,有效长度 40 cm),对影响分离 效率的因素如表面活性剂、添加剂(环糊精、己烷磺酸钠)、缓冲液 pH 及浓度、仪 I 器参数(温度、电压)进行优化,确定电泳条件为:运行缓冲液为 200 mmol·L-1 EACA 溶液,含 175 mmol·L-1 CTAB,3.0% w/v β-CD,20 mmol·L-1 己烷磺酸钠,用乙酸调 pH 4.2;运行电压-10 kV,温度 20°C;压力进样 5 kPa × 10 s;检测波长 220 nm。该 方法专属性好,准确度高,重复性好,可以满足戈舍瑞林有关物质检测的要求。与 RP-HPLC 法相比,该方法解决杂质混合峰问题,且分析时间短。实验还对戈舍瑞林 稳定性进行了表征,了解其杂质变化情况,为药物的进一步研究提供参考。 3. 毛细管电泳对促黄体素释放激素类似物的分离研究。 实验以结构相似的四种 LHRH 类似物(阿拉瑞林、亮丙瑞林、戈舍瑞林及曲普 瑞林)为模型分析物,建立了 CE 法对其进行分离。重点考察环糊精、表面活性剂、 有机溶剂等添加剂对分离效果的影响,为结构相似肽的分离及多肽药物有关物质的 分析提供参考。实验通过添加 γ-CD 改善分离效果,在毛细管区带电泳模式下使四种 LHRH 类似物得到很好分离;同时还使用表面活性剂,在胶束电动毛细管色谱模式 下进行分离。其中 CTAB 体系方法简便,分离效果好,分析速度快;CHAPS 体系通 过加入有机溶剂也实现了四种 LHRH 类似物的分离。实验显示毛细管电泳在分离结 构相似多肽方

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