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- 约4.83万字
- 约 80页
- 2019-05-11 发布于上海
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中文摘要
本论文通过研究黄霉素产生菌株的选育及其发酵工艺条件优化,所得研究结
果与我公司 2010 年初黃霉素菌株的效价水平相比,摇瓶效价提高了 2355u/mL, 50L 中试发酵罐效价水平提高了 1647 u/mL(连续三批中试产品的平均值),显著
降低了我公司黃霉素产品的生产成本。
首先,通过氮离子注入诱变法确定黄霉素产生菌耐自身代谢产物的浓度。通 过比较不同剂量氮离子注入诱发的黄霉素产生菌株的致死率和正突变率结果,确
定出最佳氮离子注入剂量。黄霉素产生菌经诱变,其单菌形态发生了很大变化。
经实验得出,发酵产素能力高的菌株呈表面光滑,边缘无皱褶或少量皱褶。经过 大量的初筛和复筛后,得到一株黃霉素高产菌株,且遗传稳定性良好。
其次,对高产菌株的发酵培养基配方,如碳源、氮源、无机盐、表面活性剂
等原材料进行优化,得到最佳培养基配方为:葡萄糖浓度 4%,玉米浆浓度 3%, 黄豆饼粉浓度 1%,K2HPO4 浓度 0.20%,NaCl 浓度 0.3%,MgSO4 浓度 0.06%,
CaCO3 浓度 0.03%,有机硅消泡剂浓度 0.12%;经过 PB 试验设计和响应曲面试
验设计,得出影响黄霉素发酵效价的三个重要因素及其浓度,葡萄糖:浓度
5.56%,玉米浆:浓度 1.15%,黄豆饼粉:浓度 2.56%。 再次,对所得高产菌株的发酵条件,如温度、pH、装液量、接种量、种龄、
转速等进行了优化研究,得到最佳发酵条件为:温度 37℃,装液量 100mL,pH5.0,
种龄 26h,接重量 10﹪,转速 210rpm;经过 PB 试验设计和响应曲面试验设计, 得出影响黄霉素发酵的三个重要工艺条件,温度:37℃,种龄:29h,接种量: 12.5%。
最后,将所得高产菌株放大到中试 50L 罐,研究通气量、搅拌对溶氧和发 酵效价的影响。通过优化得到,通气量为 2vvm-1,搅拌转速为 200rpm。
关键词:菌种选育 氮离子注入 培养基条件优化 发酵工艺条件优化
Abstract
Strain breeding and fermentation process of flavomycin were studied in this article. Compared to flavomycin potency levels in 2010, these studies achieved meaningful results: potency in shaking flask phase is increased by 2355u/mL; potency in 50-L fermentation tank phase is increased by 1647 u/mL.
Firstly, a concentration is established in which flavomycin strains are resistant to their metabolitic products. Study the mutagenic effect of parent strains via nitrogen ion implantation method. An appropriate nitrogen ion implantation dosage is chosen via study the fatality rate and positive mutation rate caused by different dosage of nitrogen ion implantation. By means of preliminary screening and second screening, a high- yield strain is achieved, which possesses good genetic stability.
Secondly, the medium formula prepared for above achieved high-yield strain is optimized. The optimum medium formula is confirmed as following: glucose: 4%, corn steep liquor: 3%, soybean powder: 1%, K2HPO4: 0.20%, NaCl: 0.3%, MgSO4: 0.06%, CaCO3: 0.03%; organosilicon antifoamer: 0.12%. Three critical factors and their concentrations are drawn by
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