黄芪对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2活性的影响及其作用机制-内科学(心血管病)专业毕业论文.docxVIP

浙江大学博士学位论文黄苠对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶．2 浙江大学博士学位论文 黄苠对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶．2 活性的影响及其作用机制 浙江大学医学院 内科学(心血管病) 博士研究生 ，r进宇 导 师 单江 教授 导师组成员 徐耕 傅圆胜 方向明 马骥 中文摘要 经皮腔内冠状动脉成形术(pcrcutancous transluminal coronary angioplasty，PTCA)是治 疗冠0病的有效手段之一，其在临床的应用显著降低了冠洲芮事件的发生率和死亡率，使 该类患者院内救治成功率大大提高，但术后六个月内再狭窄的发生率高达30％．50％，这严 重影响了治疗的远期疗效。许多学者致力于防治再狭窄的基础和临床研究，但到目前为止 尚未取得明显进展。再狭窄的发生机制目前尚未十分清楚，但近年来的研究普遍认为PTCA 术后，血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)在中层增殖并通过细胞外基质 (extraeellular matrix，ECM)的降解迁移至内膜而形成新生内膜是再狭窄发生的重要机理之 一。基质金属蛋白酶(matrix metanoproteinases，MMPs)是近年来发现的一类Zn2+依赖性 并以ECM成分为水解底物的内肽酶所组成的蛋白酶超家族，研究发现M]VIPs与ECM降解 及VSMC增殖和迁移有着密切关系，在再狭窄的发生、发展过程中起重要作用。目前中药 浙江大学博士学位论文对VSMC分泌IvlMPs活性的调节作用尚未见报导。本实验以培养的sD大鼠VSMC为研究对 浙江大学博士学位论文 对VSMC分泌IvlMPs活性的调节作用尚未见报导。本实验以培养的sD大鼠VSMC为研究对 象，观察了中药黄芪对大鼠VSMC分泌的MMP-2活性的影响并探讨其可能的作用机理。 第一部分 黄芪对血管平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶．2活性的影响 研究目的：分别观察黄芪注射液对培养的sD大鼠VSMC分泌的MlVlP-2活性的抑制作用 及对细胞培养液上清中一氧化氮(Nitric Oxide，NO)水平的作用，并了解是否存在 量效和时效关系。 方 法：组织贴块法培养SD大鼠VSMC；免疫组化染色法鉴定VSMC：Zymography检 测VSMC分泌的MIVIP．2活性；硝酸还原酶法测定细胞培养液上潦中NO水平。所 有培养液均含0．4mM L-精氨酸。每组n--4。 结 果：在一氧化氮合成前体～L．精氨酸存在的情况下，0．5mg／ml，5 mg／ml，50mg／ml的黄 芪注射液分别刺激VSMC 24h，VSMC的IVl／VlP．2活性分别为81．75±6．40％，67．00± 11．75％．52．75±11．18％，与对照组(100％)比较显著升高俨O．05，n--4)，细胞培养 上清中的NO浓度分别为51．82±13．19¨M，L、120．57±29．85 gM／L、185．46±37．23 ¨M／L，较对照组(15．32+4．38 gM／L)明显升高(P0,05，n--．4)；黄芪注射液5 mg／m1 分别刺激VSMC 0,6，12，24h后，VSMC的MMP-2活性分别为96．51±5．31％，78．78± 6．56％,74．13±5．39％，66．00_+6．07％，与对照组各相应时点IVlMP．2活性(100％，96．78 ±4．78％，97．59_+4．54％．103．94±3．36％)相比较，除刺激即刻无显著差异外(P0．05， n--4)，余均较对照组明显下降(P0．05，n=4)；细胞培养上清中的NO浓度分别为14．28 -+3．69 rlM／L、36．72+_6．94肌、69．63±9．54M，L、t25．61±14．51 pM几，与对照 组各相应时点(13．93±4．02 uM，L、12．66±5．41}tM／L、14．25±5．87 vM／L、12．90± 3．31 gM／L)相比较，除刺激即刻无显著差异外(Po．05，n--4)，余均较对照组明显升 高(P0．05,n=4)。 2 浙江大学博士学位论文结 浙江大学博士学位论文 结 论：黄芪注射液在体外抑制SD大鼠VSMC分泌MMP．2的活性，且此作用呈药物 浓度和时间依赖；黄芪注射液刺激VSMC后，培养液上清中的NO水平明显上升， 此作用也呈药物浓度和时间依赖。 第二部分黄芪对血管平滑肌细胞分泌基质金属 蛋白酶一2活性影响的作用机制 研究目的；进一步观察NO在黄芪注射液抑制sD大鼠VSMC分泌的MMP-2活性中的作 用，并探讨可能的机制。 方 法；体外培养sD大鼠VSMC，Zymography检测VSMC分泌的MMP．2活性：Western 印迹杂交法检测MMP．2及诱导型一氧化氮合酶(iNO