慢性铜暴露恶化AD转基因小鼠空间记忆的关键分子筛选-微生物与生化药学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 摘要 目的：阿尔兹海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种常见的神经退行性 疾病，其主要临床表现为认知功能的渐进性损伤。过量的铜暴露能够加速 AD 的 发生与发展，但是目前对于铜是通过何种机制影响 AD（如空间记忆）尚不清楚。 本文旨在初步探讨慢性铜暴露对 AD 空间记忆的影响并筛选出参与该过程的关 键蛋白。 方法：本文选用 6 月龄的三转基因 AD（3xTg-AD）小鼠作为 AD 模型，用 含 250 ppm 硫酸铜的饮用水喂养其 6 个月，同时以未暴露铜的 3xTg-AD 小鼠和 野生型（wide-type，WT）小鼠作为对照。首先，采用水迷宫实验检测慢性铜暴 露对 3xTg-AD 小鼠的记忆能力的影响。随后，我们利用荧光差异双向凝胶电泳 （two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis，2D-DIGE）结合质谱 分析的方法研究慢性铜暴露对 3xTg-AD 小鼠海马蛋白质组的影响。最后，使用 Western blot 对差异蛋白进行进一步的验证。 结果：水迷宫实验结果显示，慢性铜暴露可加速 3xTg-AD 小鼠的记忆损伤。 2D-DIGE 结合质谱分析的结果表明，在 3xTg-AD 小鼠与 WT 小鼠海马组织中共 有 39 个差异表达的蛋白。慢性铜暴露后的 3xTg-AD 小鼠与未暴露的 3xTg-AD 小鼠相比，其海马组织中共有 37 个差异表达的蛋白。其中，记忆相关蛋白 complexin-1 和 complexin-2 在未暴露的 3xTg-AD 小鼠海马组织中表达量下调（与 WT 小鼠相比），而在慢性铜暴露后的 3xTg-AD 小鼠海马组织中其表达量进一步 下调。Western blot 进一步验证了 complexin-1 与 complexin-2 的表达，其结果与 2D-DIGE 的结果的一致。 结论：综上结果表明，慢性铜暴露加速了 3xTg-AD 小鼠的记忆损伤，并改 变了其海马组织中多种蛋白的表达。海马 complexin-1 和 complexin-2 蛋白可能 是参与慢性铜暴露恶化 3xTg-AD 小鼠记忆损伤过程的关键分子。 关键词：阿尔兹海默病；铜；记忆损伤；荧光差异双向凝胶电泳 I Abstract Objective: Alzheimer’s disease (AD) is the most common neurodegenerative disease characterized by a progressive impairment of cognitive functions including spatial learning and memory. Excess copper exposure accelerates the development of AD; however, the potential mechanisms by which copper exacerbates the symptoms of AD like memory remain unknown. In this study, we aimed at preliminarily exploring the effects of chronic copper exposure on spatial memory of AD and identifying key molecules involved in this process. Methods: In this study, we used 6 month-old triple transgenic AD (3xTg-AD) mice as AD mice model and treated them with 250 ppm copper sulfate in drinking water for 6 months, at the same time using non-exposed 3xTg-AD mice and wide-type (WT) mice as control. First, the Morris water maze test was employed to detect the effects of chronic copper exposure on memory of 3xTg-AD mice. Then, we used two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis (2D-DIGE) coupled with mass spectro