棉花成花素同源基因GhFTL1启动子的克隆与功能初步分析-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

Cotton flower prime promoter of the homologous gene GhFTL1 Cloning and Functional Analysis A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Natural Science By Zhang Dingguo (Biochemistry and Molecular Biology) Dissertation Supervisor: Prof.Cui Baiming June, 2012 1 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除 文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主 管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。 有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编 出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 研究生签名： 时间： 年 月 日 导师签名： 时间： 年 月 日 棉花成花素同源基因 棉花成花素同源基因 GhFTL1 启动子的克隆与功能初步分析 摘 要 棉花是我国的重要的经济作物之一，新疆是我国棉花的主产区，因为无霜期短的原 因，低温会对未成熟的棉花的品质以及纤维都有一定的影响，所以中早熟棉花新品种的 创新与研究是很有必要的，植物早花可以解决以上的问题。植物早花不但受自身体内相 关基因表达的调控，还受环境等因素的影响。成花素是所有开花植物所必需的，成花素 的本质是 FT 蛋白，FT 蛋白(诱导开花的成花素信号分子)从叶片经过韧皮部长距离运输 到达茎顶端分生组织后，与顶端组织特异表达的基因编码产物之间结合形成一种蛋白复 合体，共同促进下游成花基因的表达，从而促进植物开花。目前已从许多植物中分离了 FT 的同源基因。染色体歩移技术因快速、简单、高效等优点而备受青睐，使用这种技 术可以有效获取与已知序列相邻的未知序列，也是克隆启动子的一种有效方法。 在转基因棉工程中，启动子在棉花中的研究很多，但是大多的应用都是数采用了组 成型启动子。而且所用的植物表达载体大多数都是利用外源型启动子例如，CaMV 35S。 随着 Tail-PCR、SiteFinding-PCR 等克隆技术的进一步发展与不断完善，推进了启动子的 克隆进程。近些年来，许多国家已经开始对棉花的基因组进行测序，随着科学技术的不 断发展与创新，克隆技术也有了很大的改变与发现，已经成功的大量克隆并测序了许多 棉花的启动子并且对这些启动子的结构和功能也有了一定的了解。在对棉花基因启动子 的研究中，除了利用外源的启动子以外，有更多的棉花内源启动子已经被开发出来，利 用棉花内源启动子本身的特性来改良基因在棉花中的表达。 花棉花 GhFTL1 基因已经被克隆，系统进化分析表明 GhFTL1 属于 FT 亚家族成员， 是开花相关的调控基因，为了了解该基因的表达模式，通过染色体步移的方法从棉花基 因组中分离到了 GhFTL1 基因的启动子。 目的：为了克隆棉花成花素同源基因 GhFTL1 的启动子，并且对已获得的启动子片段 进行序列分析，从而进一步对该启动子进行功能初步分析。 方法：以新陆早 33 号棉花基因组 DNA 为模板，通过染色体步移的从棉花基因组中分 离 GhFTL1 基因的启动子。构建带有 GUS 报告基因和启动子与 GhFTL1 相连的载体， 明确该启动子在植物中的定位，并且对转基因拟南芥进行形态观测。 结果：首次利用染色体歩移技术从棉花基因组中分离了 GhFTL1 基因的启动子，通过 分析该启动子片段，该启动子具有一般启动子的基本元件，另外还有一些其他元件。通 过 GUS 报告基因的定位，该基因在成熟的叶片中有表达，在其它部位没有表达。为进 一步研究其功能提供了基础。 I 结论：虽然已克隆了该启动子片段，并且对该启动子所具有的一些特殊元件和功能进 行了初步分析。要想了解更多的功能、结构以及对基因的调控表达等，还需要付出更多 的努力。目前大多数任然是用 5 RACE 试剂盒来获得基因的全长，但这种方法成本高。 改良后的 TAIL-PCR 技术的非特异性扩增和成功率都提高了，另外