棉花S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因(SAMDC)克隆及功能研究-作物遗传育种专业毕业论文.docxVIP

Cloning and Functional Analysis of S-adenosylmethionine Decarboxylase (SAMDC) in cotton (Gossypium hirsutum L.) A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Agriculture By Geng Weidong (Crop Genetics and Breeding) Dissertation Supervisor: Prof. Sun Jie May, 2012 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除 文中已经注明引用的内容外 ，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主 管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。 有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编 出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 研究生签名： 时间： 年 月 日 导师签名： 时间： 年 月 日 I I 摘 要 目的：棉花是世界上最重要的经济作物之一，在新疆农业生产中占有举足轻重的地位。新疆棉 区在生产过程中经常遭受干旱、盐碱和低温等非生物胁迫影响，使产量大幅降低，造成严重的经济 损失。多胺是一种与植物适应逆境环境密切相关的调节物质，可以减缓环境胁迫对植物的伤害。S- 腺苷甲硫氨酸脱羧酶是多胺合成代谢过程中的三个主要酶之一，通过调控植物体内多胺的含量来影 响植物应答环境胁迫。因而，对 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因的克隆和不同非生物胁迫下的表达分析， 以及对该基因的遗传转化研究，将有助于从分子水平上解析 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因调控植物体 内多胺参与植物抗逆的生理机制。 方法：（1）根据棉花 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因 EST 序列设计引物，结合 RACE 和 RT-PCR 技 术克隆陆地棉 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因；（2）利用 Gateway 技术构建 GhSAMDC 的超表达载体、 RNA 干扰载体和亚细胞定位载体；（3）实时荧光定量 PCR 分析棉花 SAMDC 基因在低温、干旱和 NaCl 胁迫下的表达特性；（4）通过超表达载体和 RNAi 载体的棉花遗传转化，初步研究基因功能。 结果：（1）棉花 SAMDC 基因 cDNA 序列长 1874 bp，存在 3 个 ORF：tORF（tiny ORF, tORF）， uORF（upstream ORF, uORF）和 mORF（main ORF, mORF），其中 mORF 长 1068bp，编码含 355 个 氨基酸残基的蛋白序列，其中包括两个保守结构域：酶原剪切位点结构域和 PEST 结构域；基因组 DNA 序列长 2743 bp，含有 3 个内含子和 4 个外显子；（2）同源分析表明，棉花 SAMDC 与葡萄 （AJ567368）亲缘关系最近，其同源性达到 76.4%。通过聚类分析，将棉花和其他 10 种双子叶植物 聚为一类。根据同源性和保守结构域将该基因命名为 GhSAMDC（GeneBank NO. JN020148）。（3） 实时荧光定量 PCR 分析显示，不同非生物胁迫下，同一品种中同一时间段 GhSAMDC 表达量的变化 趋势不同。低温胁迫下，GhSAMDC 表达呈“降-升-降-升-降-升”的趋势，干旱胁迫下呈先升后降再 升再降的趋势，NaCl 胁迫下呈“降-升-降-升”趋势。同一非生物胁迫下，同一时间段不同品种中的 表达趋势也不同，但整体看来非生物胁迫下，抗逆能力弱的新陆早 1 号中基因表达量高于抗逆能力 较强的新陆早 33 号中的基因表达量。推测 GhSAMDC 可能与逆境胁迫响应和防御有关。（4）棉花下 胚轴遗传转化表明，超表达载体转化的下胚轴较 RNAi 转化的下胚轴分化率高。初步推测，GhSAMDC 在棉花体细胞胚胎发生过程中发挥一定作用。GhSAMDC 的具体作用目前还不清楚，有待进一步研 究。 结论：（1）克隆获得棉花 SAMDC 基因 cDNA 序列和基因组 DNA 序列；（2）基因表达分析表明 GhSAMDC 基因参与植物非生物胁迫应答，且在不同胁迫条件下表现出不