氯化甲基汞诱导的神经免疫炎症及α7烟碱型乙酰胆碱受体介导的抗炎作用-人体解剖与组织胚胎学专业毕业论文.docxVIP

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  • 2019-05-11 发布于上海
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氯化甲基汞诱导的神经免疫炎症及α7烟碱型乙酰胆碱受体介导的抗炎作用-人体解剖与组织胚胎学专业毕业论文.docx

万方数据 万方数据 本人 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进 行研究工作所取得的成果,无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明 引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品 成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式 标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明 宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文,同意学校按规定向国家有 关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权宁 夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公 布(包括刊登)论文的全部或部分内容。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学硕士研究生学位论文摘要 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 摘要 氯化甲基汞诱导的神经免疫炎症及 α7 烟碱型乙酰胆碱受体介导的抗炎作用 摘 要 甲基汞可以引起神经免疫炎症反应,但其作用机理尚未阐明。小胶质细胞是中枢神 经系统的主要免疫细胞,被激活可释放多种细胞因子和炎症介质,影响慢性炎症引起的 各 种 中 枢 神 经 系 统 疾 病 的 病 程 和 转 归 。 α 7 烟 碱 型 乙 酰 胆 碱 受 体 ( α 7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)作为免疫细胞中胆碱能抗炎通路的关键分子,是调 节小胶质细胞活化和抑制炎症发生的调控位点。 研究目的:探讨氯化甲基汞(methylmercury chlorid,MeHgCl)神经免疫毒性作用 机制及α7nAChR 抗炎通路的保护作用。 研究方法: 第一部分:甲基汞染毒模型的制备及烟碱的干预作用。实验动物随机分为对照组、 模型组、N 干预组和 N 组,每组 10 只。模型组 MeHgCl 染毒,N 干预组和 N 组给予烟碱 (nicotine,Nic)治疗,对照组给予等量生理盐水,共 12 周。应用免疫荧光法观察 Nic 对 MeHgCl 暴露大鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)α7nAChR 与 Iba-1 阳性细胞表达 的影响;采用 qRT-PCR 技术检测 Nic 对 MeHgCl 暴露大鼠海马α7nAChR mRNA 的表达 水平影响;采用 Dot-Blot 法测定海马 IL-1β、IL-6 和 IL-10 的水平;用 ELISA 法检测血 清 IL-1β水平。 第二部分:甲基汞染毒细胞模型的制备及 Nic 和 MLA 的干预作用。采用 MeHgCl 暴露致 BV2 细 胞 和 PC12 细 胞 染 毒 模 型 为 研 究 对 象 , 观 察 Nic 、 甲 基 牛 扁 亭 碱 (methyllycaconitine,MLA)对 MeHgCl 暴露下 BV2 细胞和 PC12 细胞的影响。首先用 MTT 比色法动态观察不同浓度 MeHgCl 对细胞活力的影响。然后,将实验随机分为对 I 宁夏医科大学硕 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 摘要 照组、模型组、N 干预组、M 干预组、N 组和 M 组。N 干预组和 M 干预组分别给予 Nic 和 MLA 预处理后染毒,对照组给予等量 PBS,处理 12h、24h、48h 后检测各项指标的改变。 采用 MTT 法观察细胞活力的改变。通过 ELISA 法动态检测 BV2 细胞释放 IL-1β、IL-6 和 IL-10 水平的变化。采用 qRT-PCR 技术测定 BV2 细胞α7nAChR、NF-κB(p65)和 COX-2 mRNA 表达水平,观察不同浓度 MeHgCl 对 PC12 细胞α7nAChR mRNA 表达水 平的影响。采用细胞免疫组织化学法观察小胶质细胞α7nAChR、EP3 和 p65 蛋白,和 PC12 细胞α7nAChR 的表达。 所有结果用?x±s 表示。实验数据采用 SPSS17.0 软件分析,各组间比较用单因素方 差分析,两两比较采用 LSD 法,检验水准 α=0.05,以 P0.05 表示有显著性差异。 结果 在体实验部分: 1、Nic 对 MeHgCl 暴露大鼠海马 DG 区α7nAChR 与 Iba-1 阳性细胞表达的影响。 结果显示,与对照组相比,模型组α7nAChR 阳性细胞减少,特异性表达 Iba-1 的小胶 质细胞增多,呈阿米巴样;与模型组比较,N 干预组α7nAChR 阳性细胞和小胶质细胞 数量明显增多,小胶质细胞轮廓清晰,有突起。 2、Nic 对 MeHgCl 暴露大鼠海马α7

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