黄芪多糖通过干预CLP小鼠DC细胞对脓毒症的影响及机制研究-病理学与病理生理学专业毕业论文.docxVIP

广东药学 院学位论文原创性声明 本人郑重声明 : 本人所呈交 的学位 论文 ，系我个人在导 州的指 导下 进行研究工作 所取得的成果 。除文中己特别加以标Yi 手11致谢的地方外， 不包含其它个 人或机构己经发表或撰写过的研究成果 。对本研究做川1贡 献的其它 个人和 集体， 均己在文中 明币0+川S l刑和致谢 。本人充分意识到本 声明的法律结果完全由本人承担 。  学位论文作者签名 :兹A 孔 H 期 : VOI萨 5月仔EI 学位论文使用授权 的声 明 本人完全了解广东药学院有关保留和使用学位论文的规定，学校行 权保留不口 向有关部 门或机构送交本ì! 文的复印件和!电 TJ板，允许论文被 查 油和借 阅。学校可以将本学 位论 文 的全部或部 分 内容编入 有关数据库， 口J 以采用影印、缩印或其它复 印手段保存年1 1 汇编本学位论文 。 保密论文在解密后适用 本声明 。 论文作者签名 :1rl，Ft 论文导师签名 :张丽若 H 期 : l5 年纠 如 广东药学院硕士研究生学位论文 广东药学院硕士研究生学位论文 目 录 摘要 I ABSTRACT V 前言 1 第一部分 4 1 材料与方法 4 1.1 主要仪器设备 4 1.2 主要试剂 5 1.2.1 树突状细胞提取、培养及检测试剂 5 1.2.2 树突状细胞表面单克隆荧光抗体 II 6 1.2.3 主要试剂配制 6 1.3 主要药物及配制 7 1.3.1 药物 7 2 实验方法 7 2.1 实验动物模型及分组 7 2.1.1 CLP 造模 8 2.1.2 分组 8 2.2 免疫磁珠分选 8 2.2.1 正常小鼠脾的 DC 细胞的获取 8 2.2.2 免疫磁珠分选 9 2.3 荧光染色 10 2.4 流式细胞术 10 2.5 ELISA（酶联吸附试验） 10 2.6 DC 细胞注入脓毒症小鼠体内后生存率观察 11 2.7 统计学处理 11 3 结果 11 4 讨论 20 第二部分 22 1 实验材料和仪器（同上） 22 2 实验方法 22 2.1 造模及分组 22 2.2 CD4+T 细胞的获取 22 2.3 混合淋巴细胞反应 23 2.4 APS 刺激后 CD11CHIGH DC 对 T 淋巴细胞的功能性极化（TH1/TH2 漂移）的 检测 23 2.5 细胞回输 24 2.6 统计学方法 24 3 结果 24 4 讨论 28 全文总结 30 参考文献 31 中英文缩写语对照表 34 综述 35 攻读学位期间发表的文章 41 致谢 42 I I 黄芪多糖对 CLP 鼠的树突状细胞亚群的影响及细胞回输 后的探讨 研究生：张 小凡 专 业：病理学与病理生理学 导 师：张丽蓉 副教授 摘 要 脓毒症即机体在遭受外界打击时引起的全身炎症反应，脓毒症发病过程就是一个 免疫紊乱过程，早期主要表现为免疫过度，后期出现免疫抑制。在脓毒症期间树突状 细胞功能和分泌都是受到抑制的，激活或者恢复树突状细胞的活性，能够很好地改善 脓毒症症状，因此我们可以将 DC 细胞作为治疗脓毒症的一个作用靶点，沿着这个思 路，我们只需要寻找出一种能够活化 DC 细胞的药物是不是就可以达到治疗脓毒症的 目的？ 我国药典中规定，中药黄芪取自蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，主要在我国的东 北和华北地区分布，被广泛应用于传统中医药学。近年来研究已经发现黄芪有很多生 物活性成分，如多糖、皂苷、黄酮等，其中以易得、便宜，成熟提取技术和明确的有 效成分的黄芩多糖（APS）的研究为多。大量的科学实验证明 APS 对机体体液免疫与 细胞免疫有着广泛的影响，并能够调节细胞因子的分泌。我们实验室前期已经探讨了 发现 APS 能够活化正常小鼠脾的 DC，因此我们尝试着将黄芪多糖（APS）作为靶点 药物，探讨 APS 对脓毒症时 DC 的作用关系，并为黄芪多糖以 DC 为作用靶点治疗脓 毒症提供临床依据。 鉴于此，我们将本研究分为两个部分探讨： 第一部分，在体实验中初步探讨 APS 干预 CLP 小鼠脾中的 DC 后，DC 的数量、 表型以及体内相关炎症因子的变化情况； II II 第二部分，体外实验进一步明确 APS 如何对 DC 产生作用，从而达到对脓毒症 小鼠有保护作用，通过细胞回输，将理论结合应用，为 APS 以 DC 作为靶点治疗脓 毒症提供依据。 方法： 第一部分 在体实验中初步探讨 APS 对 CLP 小鼠的 DC 亚群的影响 1、造模及分组，60 只 C57BL/6、SPF 级健康雄性小鼠，应用盲肠结扎穿孔（CLP） 制备成 CLP 脓毒模型鼠，分为四组（CLP、APS-50mg/g、APS-100mg/g、APS-200mg/g）。