黄连麦冬提取物对体外培养大鼠结膜杯状细胞增殖作用及有效成分配伍筛选的实验研究-中西医结合临床 (眼科)专业毕业论文.docxVIP

成都中医药大学硕士学位论文 成都中医药大学硕士学位论文 目录 中 文 摘 要 1 ABSTRACT 2 缩略语对照表 4 1.前言 5 1.1 研究背景 5 1.1.1 干眼的流行病学研究概况 5 1.1.2 结膜杯状细胞的研究概况 5 1.1.3 黄连的功效及药理作用研究概况 6 1.1.4 黄连对眼前节疾病的治疗研究概况 7 1.1.5 麦冬的功效及药理作用研究概况 8 1.1.6 麦冬治疗干眼的研究概况 8 1.2 研究目的及意义 9 2 黄连麦冬提取物有效成分的计算、溶解与稀释 10 2.1 黄连麦冬提取物有效成分的计算、溶解与稀释 10 2.1.1 实验材料 10 2.1.2 实验方法 10 2.1.3 实验结果 11 3. RCJ-GCS 体外常规培养模型的建立 12 3.1 RCJ-GCS 体外常规培养模型的建立 12 3.1.1 实验材料 12 3.1.2 实验方法 14 3.1.3 实验结果与分析 15 4 MTT 法检测不同浓度黄连麦冬提取物干预 RCJ-GCS48H 细胞的增殖活性 18 4.1MTT 法检测不同浓度黄连麦冬提取物干预 RCJ-GCS48H 细胞的增殖活性 18 4.1.1 实验材料 18 4.1.2 实验方法 19 4.1.3 实验数据统计分析方法 19 4.1.4 实验结果与分析 20 5 MTT 法检测黄连麦冬提取物有效成分配伍分别干预 RCJ-GCS24H 和 48H 细胞的增殖活性 25 5.1MTT 法检测黄连麦冬提取物有效成分配伍分别干预 RCJ-GCS24H 和 48H 细胞的增殖活性 25 5.1.1 实验材料 25 5.1.2 实验设计 26 5.1.3 实验方法 26 5.1.4 实验结果与分析 27 6.流式细胞仪检测黄连麦冬提取物有效成分配伍干预 RCJ-GCS48H 细胞周期的变化 30 6.1 流式细胞仪检测黄连麦冬提取物有效成分配伍干预 RCJ-GCS48H 细胞周期的变化 30 6.1.1 实验材料 30 6.1.2 实验方法 31 6.1.3 实验结果与分析 31 7.BRADFORD 蛋白质定量法检黄连麦冬有效成分测配伍干预 RCJ-GCS48H 细胞粘蛋白分泌量的变化 34 7.1BRADFORD 蛋白质定量法检测黄连麦冬有效成分配伍干预 RCJ-GCS48H 细胞粘蛋白分泌量的变化 34 7.1.1 实验材料 34 7.1.2 实验原理与方法 34 7.1.3 实验结果与分析 35 .讨论 37 8.1 中医对干眼病因病机的认识与探讨 37 8.2 西医对干眼病因及发病机制的认识与探讨 39 8.3 中医和西医对干眼治疗现状的认识与探讨 40 8.4RCJ-GCS 体外常规培养模型建立的评价与探讨 40 8.5 黄连麦冬提取物对 RCJ-GCS 增殖作用机制的初步探讨 41 8.6 黄连麦冬有限成分不同配伍对 RCJ-GCS 增殖作用机制的初步探讨 42 8.7 黄连麦冬有限成分不同配伍对 RCJ-GCS 细胞周期作用机制的初步探讨 42 8.8 黄连麦冬有限成分不同配伍对 RCJ-GCS 细胞粘蛋白分泌功能影响的探讨 43 .结论 44 10.问题与展望 45 11.参考文献 46 附：1.综述 49 1.1 黄连和麦冬提取物的药理作用研究进展 49 1.1.1 黄连提取物的药理作用研究进展 49 1.1.2 麦冬提取物的药理作用研究进展 52 1.2 干眼治疗的研究进展 55 1.2.1 干眼的西医治疗研究进展 55 1.2.2 干眼的中医治疗研究进展 58 1.3 结膜杯状细胞培养的研究进展 59 附 2.综述参考文献 60 附录 67 致谢 68 申明 69 PAGE PAGE 1 中 文 摘 要 目的：（1）建立 SD 大鼠结膜杯状细胞（Rat Conjunctival Goblet Cells，RCj-GCs） 体外常规培养模型；（2）观察黄连麦冬五种提取物干预 RCj-GCs 48h 的增殖活性； （3）观察有效成分配伍对 RCj-GCs 分别干预 24h 和 48h 的增殖活性；（4）观察 有效成分配伍对 RCj-GCs 干预 48h 细胞周期的影响；（5）观察有效成分配伍对 RCj-GCs 干预 48h 细胞粘蛋白分泌的影响。 方法：（1）组织块原代培养法培养细胞并用组化和免疫组化鉴定细胞；（2）将五 种实验药：黄连多糖（CP）、黄连生物碱（CA）、麦冬多糖（DLP）、麦冬高异黄 酮（DLI）、麦冬皂苷（DLS），分别溶解并稀释为 8 个实验组，终浓度分别为 10mg/ml、 5 mg/ml、1 mg/ml、