酶解虾副产物制备ACE抑制肽-食品科学与工程专业毕业论文.docxVIP

万方 万方数据 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文《酶解虾副产物制备 ACE 抑制 肤)) ，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除 文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经 发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集 体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果 由本人承担。 学位论文作者签名:在吃 日期训4年 l 月 15 日 、 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密口，在一年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密国。 (请在以上方框内打，.; .)。 学位论文作者签名:左吃 日期:bJ I件年 | 月 15 日 指导教师签名: 兰总是半 日期: 到 1非 (月1 了1 日 上海交通大学硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 本研究承蒙 国家海洋局海洋公益性行业科研专项经费项目 （2012418031） 资助 酶解虾副产物制备 ACE 抑制肽 摘 要 虾仁加工过程中，产生了大量的虾副产物。为了提高虾副产物的资源利用率， 本文拟利用酶法水解虾副产物制备 ACE 抑制肽。具体研究内容如下： 首先搜集了 60 个公开报道的食源性 ACE 抑制肽，分析了氨基酸的疏水性对 ACE 抑制活性的影响，以及 20 种氨基酸在 C 端、N 端的出现频率，发现 ACE 抑 制肽 C 末端氨基酸的疏水性与其 ACE 抑制活性之间呈正相关关系；芳香族氨基酸 或脯氨酸在 ACE 抑制肽 C 末端出现频率较高。然后，分析了常用水解酶的酶切位 点，最后选择 α-胰凝乳蛋白酶和脯氨酸蛋白酶复合酶解虾副产物制备 ACE 抑制肽。 其次，分析了虾副产物的蛋白质含量和氨基酸组成，虾副产物中蛋白质含量为 59.94%，与 ACE 抑制活性相关的芳香族氨基酸和脯氨酸含量为 14.24%。在一定温 度、pH 值和加酶量条件下，以蛋白质的水解度和 ACE 抑制率为指标，确定 α-胰凝 乳蛋白酶、脯氨酸蛋白酶的最佳酶解时间均为 4h，酶解产物 ACE 抑制的 IC50 值为 1.645mg protein/mL。 然后，对虾副产物酶解液进行分离、纯化。第一步用 500Da 和 1000Da 的透析 袋进行透析，得到 0~500Da (F1)与 500~1000Da (F2)两个组分，透析后组分 F1 和组 分 F2 的 IC50 值分别降为 0.333mg peptide/mL 和 1.320mg peptide/mL；第二步采用凝 胶层析对组分 F1 和组分 F2 继续分离：组分 F1 和组分 F2 都被分成了 5 个峰，组分 F1 中峰 F1-G5 的 ACE 抑制率最高，为 49.24%；组分 F2 中峰 F2-G2 的 ACE 抑制 率最高，为 39.07%。分别选择峰 F1-G5 和峰 F2-G2 这两个峰进行后续分离。第三 步采用 RP-HPLC 分离，RP-HPLC 分离结果显示，峰 F1-G5 可以分为 6 个峰，其中 峰 F1-G5-H1 和峰 F1-G5-H4 的 ACE 抑制率最高，分别为 94.21%、95.88%；峰 F2-G2 可以分为 4 个峰，只有峰 F2-G2-H1 和峰 F2-G2-H2 有活性，ACE 抑制率分别为 32.86%、20.75%。然后对这几个峰分别收集浓缩，用质谱分析肽序列。 质谱分析结果表明：这 4 个峰中共含有 25 个肽，这些肽分别由 5~14 个氨基酸 组成。25 个已知序列多肽中有 22 个多肽的羧基端是脯氨酸或芳香族氨基酸，与预 期相符。 最后，用胃肠道消化酶水解峰 F1-G5-H1、峰 F1-G5-H4、峰 F2-G2-H1、峰 F2-G2-H2 这四个峰。结果表明，峰 F1-G5-H1、峰 F1-G5-H4 和峰 F2-G2-H2 经过消 I 化酶水解之后，ACE 抑制率降低，说明这些序列比较长的肽段，容易被胃肠道消化 酶水解成无 ACE 抑制活性的肽段，导致抑制活性下降；峰 F2-G2-H1 经过消化酶水 解之后 ACE 抑制率上升，可能是因为水解产生了 ACE 抑制活性更高的肽。 综上所述，用α-胰凝乳蛋白酶和脯氨酸蛋白酶复合酶解虾副产物能制备得到 C 末端为芳香族氨基酸或脯氨酸的 ACE 抑制肽，该研究丰富了 ACE 抑制肽的来源， 为虾副产物的高效利用提供了新思路。 关键词：定量构效关系；α-胰凝