绿茶多酚对高脂饮食大鼠HMGCS2表达的影响-营养与食品卫生学专业毕业论文.docxVIP

华中科技 大学硕士学位论 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE PAGE 10 绿茶多酚对高脂饮食大鼠 HMGCS2 表达的影响 硕士研究生：廖丹 导 师：应晨江 教授 摘 要 目的和意义：酮体是脂肪酸不完全氧化的产物，包括乙酰乙酸、β-羟丁 酸及丙酮。传统观念认为，酮体仅是一种肝内产生肝外利用的能量物质，是 引起糖尿病酮症酸中毒的原因。此外，在饥饿、长时间运动、限能、高脂及 低碳水化合物饮食情况下，机体产生酮体也会明显增多。最新关于阿尔茨海 默、帕金森、癫痫和中风动物模型的研究表明，酮体不仅具有能量补充作用， 而且具有明显的抗氧化保护作用，但具体的机制尚不清楚。线粒体羟甲基戊 二酸单酰辅酶（HMG-CoA）合成酶（HMGCS2）是酮体生成关键酶，以往 研究发现其主要存在于人体和哺乳动物的肝脏，最近发现肾脏、脑等重要器 官及其他组织也广泛表达；而且其表达与活性成正相关，与酮体产生的量也 成正比。蛋白质组学技术发现 HMGCS2 在卒中易感型自发性高血压大鼠 （SHRSP）和自发性高血压大鼠（SHR）肾脏组织存在表达差异，PPARα 激动剂氯贝特能明显上调 SHRSP 肾脏组织 HMGCS2 表达，增强 SHRSP 大 鼠肾组织抗氧化能力，并提高 SHRSP 的存活率。代谢综合征（Metabolic syndrome, MS）是以腹型肥胖、胰岛素抵抗、高血压、脂代谢异常、糖耐量 下降或 2 型糖尿病为主要特征的症候群，共同发病机制为胰岛素抵抗。MS 是近年来国内外关注的热点，大量的研究表明，MS 是心脑血管疾病的最重 要危险因素，而后者正是目前全球第一位的死亡原因。研究表明，MS 患者 体内呈现较高的氧化应激水平，并且抗氧化治疗能明显缓解 MS 症状。肾脏 是 MS 的重要靶器官之一，虽然只占总体重的 0.5%，但其耗氧量占体内总耗 氧量的 10%，其中 1/5 转化为不安定的活性 ROS，所以氧化应激是肾脏损伤 的重要病理基础。因此，本实验主要探讨抗氧化剂绿茶多酚对高脂饮食大鼠 HMGCS2 表达的影响，并初步探讨其调控机制。 研究方法：（1）断乳 Wistar 雄性大鼠饲养在室温 22-26℃，相对湿度 40%-50%，光照明暗各 12 h 的环境中，适应性喂养一周后，测体重、初始血 糖、胆固醇和甘油三酯，综合体重、血糖、胆固醇和甘油三酯结果后分为 5 组：正常对照组（CON）、高脂对照组（HFG）、绿茶多酚（green tea polyphenols, GTPs）低、中、高剂量干预组（G 1、G 2、G 3），每组 6 只大鼠。CON 组 喂食基础饲料；HFG 组给予高脂饲料；G 1、G 2、G 3 组大鼠喂以高脂饲料， 大鼠体重达到 180 g 后，绿茶多酚低、中、高剂量干预组通过饮水分别给予 不同剂量绿茶多酚（0.8 g/L, 1.6 g/L, 3.2 g/L）。（2）各组大鼠每周称重一次， 每月尾静脉采血检测相关指标，喂养 26 w 成功建立高脂饮食模型后处死， 断头取血，静置 15 min，3000 rpm 离心 10 min，分离血清和肾脏，﹣80℃保 存。空腹血糖（FPG）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL） 及高密度脂蛋白（HDL）测定采用 ELX 800 型酶标仪测定。实时荧光定量聚 合酶链式反应（real-time PCR）和免疫印迹（western blot）方法检测肝脏和 肾脏组织中 HMGCS2、SIRT3 的表达。 结果：（1）与 CON 组比较，HFG 组大鼠体重和脂肪系数升高，TC、TG、 LDL-C/HDL-C、FPG 均明显升高，差异具有统计学意义﹙P ＜ 0.05﹚；与 HFG 组比较，GTPs 各剂量组大鼠体重和脂肪系数都明显降低，差异具有统 计学意义﹙P ＜ 0.05﹚，GTPs 组大鼠 TC、TG、LDL-C/HDL-C、FPG 均不 同程度降低，其中，GTPs 各组 FPG、LDL-C/HDL-C 降低差异具有统计学意 义﹙P ＜ 0.05﹚，TC 在 G 2、G 3 组降低差异具有统计学意义﹙P ＜ 0.05﹚， TG 在 G 3 组降低差异具有统计学意义﹙P ＜ 0.05﹚。（2）与 CON 组比较， HFG 组大鼠肾脏 HMGCS2 蛋白表达水平降低，差异具有统计学意义﹙P ＜ 0.05﹚；与 HFG 组比较，GTPs 组明显增加肾脏 HMGCS2 的表达，差异具有 统计学意义﹙P ＜ 0.05﹚。高脂饮食、正常饮食和 GTPs 干预后，大鼠肾脏 组织 SIRT3 蛋白表达差异无统计学意义。（3）与 CON 组比较，HFG 组肝脏 HMGCS2 mRNA 和蛋白表达明显增加，差异具有统计学意义﹙P ＜ 0.05﹚； 与