面包烘烤品质基因1Dx5在冬小麦新冬-26中的遗传转化及后代检测-植物学专业毕业论文.docxVIP

I I PAGE PAGE VI 中文摘要 本文以新疆主栽耐盐冬小麦（Triticun aestivum L）品种新冬-26 作为研究对 象，采用基因工程手段，通过制备面包品质主效基因 1Dx5 的线性核心片段，采 用花粉管通道方法实现线性 1Dx5 核心片段在新冬-26 中遗传转化，获得转基因 小麦植株；并利用 SDS手段和 Multiplex-PCR 技术检测和分析外源基因 在转基因后代中的遗传表达情况，以期获得安全型的强筋与耐盐并举的转基因 小麦株系。这不仅为保障粮食安全提供了新型的种质资源，进而加快了干旱区 高品质小麦的生产步伐，同时对利用现代分子生物学技术手段改良我国小麦加 工品质、培育资源高效型农作物等都具有重大的理论价值和实践意义。 主要研究结果如下： （1）小麦及其近缘种 1Dx 亚基基因的比较分析：利用生物信息学手段，对 所选 1Dx 型亚基的核酸、蛋白质一、二级结构进行比较和分析。结果显示：在 核酸的水平上，其相似性高达 96.58%，存在有 90 个 SNPs；SNPs 造成氨基酸 水平上出现 53 个氨基酸的替换；在氨基酸水平上，其相似性高达 96.74%，并 存在 7 处氨基酸肽段的缺失/插入；在预测的蛋白质二级结构水平上，相似性高 达 97.71%，其中 SNPs 可能造成四处二级结构单元的改变，同时重复序列的插 入和缺失影响二级结构中无规卷曲的长短，其可能是影响蛋白质亚基的生物学 功能的主要因素。通过分析各基因在 DNA 和蛋白质水平上存在的差异和联系， 探究各基因在功能上差异的原因，并在一定程度上揭示各基因在分子结构、生 物学功能和物种进化三者之间的关系，为后期外源基因的检测奠定理论基础和 提供强有力的技术方案。 （2）外源基因的遗传转化和检测：以小麦品种新冬-26(Null,7+8,2+12)为实 验材料，采用花粉管通道法将线性1Dx5基因核心片段和pHMW1Dx5分别导入到 受体材料中，利用蛋白质检测手段，分析转基因小麦T0代HMW-GS的组成情况。 结果显示，线性1Dx5基因转基因小麦T0代籽粒中有5条高分子量麦谷蛋白亚基条 带，分别是1Dx2、1Bx7+1By8和1Dy12，一条新的蛋白质亚基-BandX，迁移率 快于1Dx5，其频率为0.2%；pHMW1Dx5转基因小麦T0代籽粒也产生了新蛋白质 条带，其迁移率慢于1Dx2，其频率为0.15%。 （3）pHMW1Dx5 转基因小麦后代中外源基因的检测和分析：结果显示， 采用 PCR 技术，在转基因 T0 代植株中扩增出 1Dx5 基因的特异片段大小为 450 bp，表明外源基因已整合到受体基因组中；SDS分析 T1 代籽粒外源基因 的表达，表明外源基因插入受体基因组中并表达，引起了转基因 T1 代籽粒中 HMW-GS 组成的变化，获得了 pHMW1Dx5 转基因小麦株系。本实验验证了借 助花粉管通道法转化外源基因的遗传转化策略是可行的，并使得外源基因在转 基因后代植株中遗传表达，为线性基因片段直接转化体系的建立奠定了坚实的 基础。 （4）线性 1Dx5 转基因小麦后代中外源基因的检测和分析：通过建立 Multiplex PCR 体系和运用 SDS技术对转 1Dx5 基因小麦后代进行了检测 和分析。结果显示，Multiplex-PCR 能够扩增出转基因 T0 代材料中 1Dx5 基因的 特征片段，大小为 320 bp 和 343 bp，表明外源基因已整合到受体基因组中； SDS检测到新蛋白质亚基 X，表明外源基因的插入引起了转基因 T1 代籽 粒中 HMW-GS 组成的变化，获得安全型的转基因植株，建立了基于基因捕获原 理的安全型遗传转化体系，为利用优质基因改良小麦品质和培育适合新疆盐渍 化条件下种植的安全型转基因小麦新种质探索新途径。 关键词：转基因小麦；线性 1Dx5 核心片段；遗传转化；外源基因整合；蛋白表 达； III III PAGE PAGE IV Abstract The artical make commercial wheat Xindong-26 (Triticun aestivum L), as a research object, which is a salt-tolerant and winter wheat.Using the genetic engineer -ing, the linear core fragment of 1Dx5 was prepared by PCR, following the foreign gene was imported into receptor via pollen tube pathway to obtain transgenic wheat.wit