慢病毒介导的人SLC2A9基因过表达对人近曲小管上皮细胞尿酸转运功能的影响-外科学(泌尿外科)专业毕业论文.docxVIP

慢病毒介导的人 慢病毒介导的人 SLC2A9 基因过表达对人近曲小管上皮细胞尿酸转运功能的影响 广州医科大学硕士学位论文 广州医科大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 中文摘要 慢病毒介导的人 SLC2A9 基因过表达对人近曲小管上皮细胞尿酸转 运功能的影响 学科专业：外科学（泌尿外科） 学位申请人：吴文正 指导教师：曾国华 教授 背景：肾脏尿酸结石是泌尿系结石中常见的类型，仅次于含钙结石，约占泌 尿系结石的 10%-40%。尿酸结石的成石机制主要包括 3 个方面：尿 pH 值降低、 尿量减少及高尿酸尿，其中高尿酸尿是诱发尿酸结石的关键因素之一。在人体， 尿酸排泄主要是通过肾脏进行代谢的。经肾脏滤过的尿酸有 90%被肾脏上皮细胞 重吸收，只有 10%的尿酸随尿液排出体外。因而尿液中尿酸水平的高低取决于肾 对尿酸的重吸收程度。近年来的研究表明 SLC2A9 基因编码的 GLUT9 蛋白可以 将尿酸吸收至肾小管上皮细胞胞浆内，从而调控尿酸的重吸收，并且已有多项人 群基因筛查研究显示出 SLC2A9 基因与尿酸转运之间存在很强的相关性，因此， SLC2A9 基因被认为是尿酸转运的一个重要的调控元件。本研究利用高效转染的 慢病毒作为载体构建 SLC2A9 过表达质粒，将其转染入永生化人肾脏近曲小管上 皮细胞株 HK-2 中，验证 SLC2A9 基因过表达对尿酸转运功能的影响，同时为后 期探讨 SLC2A9 基因遗传变异对尿酸结石的影响奠定基础。 目的：将 SLC2A9 基因载入慢病毒颗粒，探讨 SLC2A9 基因过表达慢病毒 颗粒感染人近曲小管上皮细胞 HK-2 后对其尿酸转运功能的影响。 方 法：PCR 反应扩增目的基因后 载入慢病毒表达载体中构建 重组载体 pLEX-SLC2A9，使用 PCR 及测序的方法对其进行鉴定，并与辅助包装质粒共感 染 293T 细胞。慢病毒颗粒感染 HK-2 细胞后，用 PCR 和 Western blot 检测 SLC2A9 基因的过表达效率，并检测 SLC2A9 过表达对其尿酸转运功能的影响。 结果：PCR 及测序结果表明重组慢病毒载体 pLEX-SLC2A9 的插入序列完全 正确，重组慢病毒载体感染 HK-2 细胞后，细胞内的 mRNA 及蛋白水平增高， 1 并且可以增强 HK-2 细胞对尿酸的转运。 结论：成功构建了 pLEX-SLC2A9 慢病毒表达载体，并证实了这一慢病毒转 染后 SLC2A9 基因的过表达可以显著增强 HK-2 细胞的尿酸转运能力，为以后进 一步研究 SLC2A9 基因的功能、尿酸转运机制及在尿酸结石形成过程中的作用奠 定了基础。 关键词：SLC2A9；慢病毒；过表达；尿酸结石；尿酸转运 论文类型：应用基础 2 Abstract The effects of human SLC2A9 gene overexpress on uric acid transport in HK-2 cells Background: Uric acid nephrolithiasis is common types of urolithiasis, accounts for 10% to 40% of all kidney stones. Three abnormalities have been strongly associated with uric acid kidney stones: persistently low urine pH, hyperuricosuria and low urine volume. Hyperuricosuria is the most important pathogenic mechanism leading to uric acid stone formation. Urate is excreted by renal proximal tubules (two-third of daily turnover) and by gastrointestinal tract (one-third of daily turnover). Almast all serum urate is initially filtered by the renal glomeruli but about 90% is reabsorbed into the blood by proximal tubule transporters. Recently, a rapid series of studies have found significant correlations between mutations in SLC2A9 gene, w