枯草芽孢杆菌对铜绿微囊藻抑制效果的研究-水产养殖专业毕业论文.docxVIP

上海海洋大学硕士学位论文 上海海洋大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 上海海洋大学硕士学位论文 答辩委员会成员名单 答辩地点：珠江所科技楼 1 楼会议室： 答辩日期：2015 年 6 月 4 日 上午 9：00 姓名 工作单位 职称 备注 邹记兴 华南农业大学 教授 主席 舒 琥 广州大学 教授 委员 于培松 广东省水产技术推 广总站 研究员 委员 郭志勋 南海水产研究所 研究员 委员 余德光 珠江水产研究所 研究员 委员 项目来源 “十二五”农村领域国家科技计划课题“池塘优势生物群落调控管理 技术研究”（2012BAD25B01） 广东省海洋渔业科技推广专项“鳢高产养殖池塘微生物调控与修复技 术研究与示范”（A201201E050 公 益性行业 （ 农业 ） 科研专项 “ 池塘复合净化技术研究与示范 ” （201203083） 广东省科技计划项目 “水产养殖优化仿真平台的研制与应用” （2012A020602018） 枯草芽孢杆菌对铜绿微囊藻抑制效果的研究 摘 要 富营养化引起的蓝藻水华等环境问题严重影响着水域生态系统，甚至威胁人 类的健康生活，寻求有效手段控制蓝藻暴发尤为关键。蓝藻暴发的根本原因在于 水体内环境失衡，因此使用生物手段解决蓝藻问题是从生态平衡角度出发的根本、 有效的方法。近年来，溶藻细菌的报道不断增多，芽孢杆菌作为研究热点在解决 蓝藻爆发引起的环境问题中受到越来越多的关注。 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是广泛存在于自然界的一种非致命性细菌， 是水产养殖常用的益生菌，有关其在控藻领域的研究尚未见报道。因此，本论文 以 枯草芽孢杆菌 为研究对象 ，研究其对 蓝藻水华主要优势种铜绿微囊藻 （Microcystis aeruginosa）的抑制效果，为使用枯草芽孢杆菌防控蓝藻水华提供理 论基础和应用指导。 主要研究结果如下： 1. 铜绿微囊藻的无菌化研究 由于实验室铜绿微囊藻常伴有附生细菌生存，影响了探讨溶藻细菌与铜绿微 囊藻的相互作用关系。因此，对铜绿微囊藻的无菌化处理显得尤为关键。本论文 首先研究了使用抗生素法处理铜绿微囊藻的可行性，结果显示使用 5mg/L 的新霉 素和硫酸庆大霉素共同处理浓度 107cells/mL 的藻细胞 24h，能将藻附生细菌完全 去除，并获得成活的铜绿微囊藻无菌株。 2. 枯草芽孢杆菌对铜绿微囊藻生长的影响 为探讨枯草芽孢杆菌对铜绿微囊藻的抑制效果，该实验研究了枯草芽孢杆菌 抑制铜绿微囊藻生长的作用方式以及枯草芽孢杆菌不同生长时期(延迟期、对数期、 稳定期和衰亡期)无菌滤液和滤液不同添加量对铜绿微囊藻生长的影响。结果表明： 枯草芽孢杆菌对数期、稳定期和衰亡期滤液抑藻效果明显好于延迟期，作用第 8d， 去除率分别达到 81.19%、91.41%、91.82%；4 个处理组铜绿微囊藻的叶绿素 a 含 量均显著低于对照组(P0.01)。在一定范围内，铜绿微囊藻受到的抑制效果与滤液 的添加量成正比。枯草芽孢杆菌对铜绿微囊藻的抑制效果是通过分泌胞外物质实 现的，且分泌物具有很强的热稳定性。 3. 枯草芽孢杆菌对铜绿微囊藻生理特性的影响 I 为探讨枯草芽孢杆菌抑制铜绿微囊藻的作用机理，该实验研究了无菌滤液影 响下铜绿微囊藻丙二醛(MDA)含量、可溶性蛋白含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性 和光合色素含量的变化。结果表明：添加枯草芽孢杆菌稳定期滤液后，铜绿微囊 藻 MDA 含量显著升高(P0.01)，说明藻细胞发生严重的膜脂过氧化；可溶性蛋白 含量先升高，说明藻细胞能合成酶类抵御外界伤害，而后降低是因为藻细胞受伤 害加深，蛋白质合成受阻；SOD 活性先升高后降低，是由于受到其歧化反应生成 物浓度的影响；铜绿微囊藻的光合色素含量显著降低，说明藻细胞光合色素被破 坏，其中类胡萝卜素受到的影响不如叶绿素 a 显著。推测枯草芽孢杆菌抑藻的作 用机理：枯草芽孢杆菌分泌的活性物质，能够破坏光合色素，影响光合作用，阻 碍蛋白质合成，抑制藻细胞的生长；同时抑制 SOD 活性，使细胞膜脂过氧化程度 不断加深，进而破坏藻细胞的完整性，表现出对藻很强的抑制效果。 综上所述，枯草芽孢杆菌对铜绿微囊藻有很好的抑制效果，是治理蓝藻水华 的理想菌种。研究结果对其在实践中大规模的生产与应用有很好的指导意义。 关键词：铜绿微囊藻，枯草芽孢杆菌，抑制，作用方式，光合色素，丙二醛， 超氧化物歧化酶，可溶性蛋白 II Inhibition Effects of Bacillus subtilis on Microcystis aeruginosa ABSTRACT Cyanobacterial blooms caused by eutrophication have resulted in se