黄连、生地及其配伍对胰岛素抵抗脂肪细胞脂联素、瘦素与抵抗素分泌及mRNA表达的影响-中西医结合临床专业毕业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 缩略词表 缩写 英文全称 中文全称 IR T2DM ROSZ ELISA RTFQ-PCR TZDs Insulin Resistance Type 2 diabetes mellitus Rosiglitazone Maleate Enzyme-linked immunosorbent assay Realtime fluores-cence quantitative pcr Thiazolidinediones 胰岛素抵抗 2 型糖尿病 马来酸罗格列酮 酶联免疫吸附测定法 荧光定量 PCR 法 噻唑烷二酮类 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 PBS Phosphate buffer saline 磷酸盐缓冲液 DMSO IBMX DXMS INS BSA MTT Dimethyl sulfoxide 3-Isobutyl-1-methylxanthine Dexamethasone Insulin Bovine serum albumin 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide 二甲基亚砜 异丁基-甲基-黄嘌呤 地塞米松 胰岛素 牛血清白蛋白 3-(4,5- 二甲基噻唑 -2)-2,5-二苯基四氮唑 溴盐 黄连、生地及其配伍对胰岛素抵抗脂肪细胞脂联素、瘦 素与抵抗素分泌及 mRNA 表达的影响 研究生：王志伟 导 师：杨明炜 副教授 摘 要 目 的 通过观察比较黄连、生地及其配伍含药血清对胰岛素抵抗(Insulin Resistance， IR)3T3-L1 脂肪细胞脂联素(Adiponectin)、瘦素(Leptin)、抵抗素(Resistin)的分泌及 mRNA 表达的影响，从脂肪细胞因子角度探讨黄连、生地及其配伍改善胰岛素抵抗的 作用机制，并通过比较黄连、生地及其配伍对上述脂肪细胞因子作用的选择性或协同 性，揭示黄连生地药对的配伍原理。 方 法 第一部分 建立 IR 3T3-L1 脂肪细胞模型,比较黄连、生地及其配伍含药血清对 IR 脂肪细胞葡萄糖消耗量的影响 将 3T3-L1 小鼠前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞，采用高糖联合胰岛素方 法建立 IR 脂肪细胞模型，将其分为模型组及各药物干预组，药物干预组分为罗格列 酮组、黄连组、生地组及黄连+生地组，分别以马来酸罗格列酮溶液(Rosiglitazone Maleate)、黄连含药血清、生地含药血清及黄连生地配伍含药血清进行干预，另设空 白血清对照组（以不含药血清进行干预）及正常组（正常脂肪细胞）。收集各组细胞 培养液上清，用葡萄糖氧化酶法检测各组葡萄糖消耗量。 第二部分 比较黄连、生地及其配伍含药血清对 IR 脂肪细胞脂联素、瘦素、抵抗素 分泌及 mRNA 表达的影响 3T3-L1 脂肪细胞的诱导分化、模型建立、分组及干预方法同上。收集细胞培养液 上清，采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)检测其 中脂联素、瘦素、抵抗素的分泌；提取细胞 RNA，以荧光定量 PCR 方法(realtime fluores-cence quantitative pcr， RTFQ PCR)检测各组细胞目的基因 mRNA 的表达。 结 果 第一部分 IR 脂肪细胞模型的建立及黄连、生地及其配伍含药血清对 IR 脂肪细胞 葡萄糖消耗量的影响 与正常组比较，模型组葡萄糖消耗量显著减少(P0.01)；与模型组比较，黄连组、 生地组、黄连+生地组、罗格列酮组葡萄糖消耗量显著增加(P0.01)，其中黄连-生地 组葡萄糖消耗量高于黄连、生地各单药组，差异有统计学意义(P0.05)。 第二部分 黄连、生地及其配伍含药血清对 IR 脂肪细胞脂联素、瘦素、抵抗素分泌 及 mRNA 表达的影响 与正常组比较，模型组脂联素分泌显著减少(P0.01)，瘦素、抵抗素分泌显著增 加(P0.01)；与模型组比较，生地组、黄连+生地组脂联素分泌显著增加(P0.01)，瘦 素、抵抗素分泌显著降低(P0.05,P0.01)，黄连组脂联素、瘦素分泌均无显著差异 (P0.05)，抵抗素分泌量显著降低(P0.05)，其中黄连+生地组脂联素、瘦素分泌与单 药生地组无显著差异(P0.05)，黄连+生地组抵抗素分泌明显低于黄连、生地各单药组 (P0.05)。 与正常组比较，模型组脂联素 mRNA 表达水平显著降低(P0.01)，抵抗素 mRNA 表达水平显著升高(P0.01)