黄芪总苷诱导人白血病NB4细胞凋亡机制的研究-内科学(血液病)专业毕业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 中英文缩略词表 TA CCK-8 Total Astragalosides Cell Counting Kit-8 黄芪总苷 细胞增殖及细胞毒性检 NF-κB Nuclear factor kappa B 测试剂盒-8 核因子-κB IκB Inhibitory kappa B 核因子-κB 抑制蛋白 Akt/PKB Protein kinase 蛋白激酶 B PI Propidium iodide 碘化丙啶 FITC fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 PS phosphatidylserine 磷酯酰丝氨酸 rpm Rotation per minute 每分钟转速 FCM Flow cytometry 流式细胞术 PBS Phosphate buffer solution 磷酸缓冲液 黄芪总苷诱导人白血病NB4细胞凋亡机制的研究 中 文 摘 要 急性早幼粒细胞白血病（APL）是急性白血病的一种特殊亚型，全反式维甲酸 （ATRA）和三氧化二砷（As2O3）可通过诱导早幼粒细胞分化、凋亡使该病缓解， 是白血病药物治疗的新的里程碑。但两者治疗中的毒副作用促使科技工作者不断 研究开发新的药物以进一步减少副反应增加疗效。中药治疗肿瘤是我国的一大特 色,由于中药的毒副作用小,使得中药抗肿瘤研究备受关注。我们前期文献阅读中 发现黄芪总苷（TA）有抗部分肿瘤细胞的作用。故设计本实验以了解TA对急性早 幼粒细胞白血病的作用。本研究证实了TA可以抑制NB4细胞增殖，并有诱导NB4 细胞凋亡的作用，为开展下一步研究工作奠定了基础，为新药物的研制展开新的 领域。 目的: 本实验探讨黄芪总苷（TA）对急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4 细胞）生 长抑制与诱导凋亡的作用，及通过流式细胞术对细胞内核因子-κB（NF-κB）和蛋 白激酶 B（Akt/PKB）蛋白的检测来探明 NB4 细胞凋亡可能的机制，为进一步的 研究及新药开发奠定基础。 方法: 选择对数生长期的 NB4 细胞，实验组加入不同浓度的 TA(200、400、600、 800 mg/L)与 NB4 细胞共培养 48 h,同时设立细胞对照组，不加入任何药物。 1.使用台盼蓝染色法观察 NB4 细胞培养生长情况及使用 TA 作用后细胞变化情 况。 2.采用倒置显微镜观察药物作用后 NB4 细胞形态的变化。 3.采用 CCK-8 比色法检测不同浓度的 TA 对 NB4 细胞增殖的影响。 4.使用流式细胞仪检测不同浓度 TA 作用于 NB4 细胞 48h 后细胞凋亡和细胞坏 死情况。 5 .使用流式细胞仪检测不同浓度 TA 作用于 NB4 细胞 48h 后细胞内 NF-κB， Akt 蛋白浓度的变化情况。 结果: 1. 不同浓度的 TA 作用细胞 48 小时后，在倒置显微镜下均可观察到 NB4 细 胞凋亡，呈现单个细胞体积缩小但细胞膜完整，胞质致密，胞质中有大量大小不 一的圆滴状空泡，核固缩、核碎裂，凋亡小体形成等典型的细胞凋亡形态。 .细胞生长抑制试验显示不同浓度的 TA(200、400、600、800 mg/L)均可抑 制 NB4 细胞生长，且抑制作用与 TA 的剂量成正相关。 .流式细胞术（FCM）结果表明不同浓度的 TA(200、400、600、800 mg/L) 均可以诱导 NB4 细胞发生凋亡。在 200、400、600 mg/L 组凋亡率呈浓度依赖性 增加；在 800 mg/L 组凋亡率增加不明显，但出现了大量的坏死细胞。 4. 不同浓度的 TA(200、400、600 mg/L)诱导 NB4 细胞凋亡过程中细胞内 NF-κB 蛋白表达明显下降，而 Akt 蛋白的表达无明显变化。 结论： TA 对 NB4 细胞生长具有明显抑制作用。在一定剂量范围内，TA 可以诱导 NB4 细胞凋亡。TA 可以通过不依赖 Akt 的 NF-κB 信号通路来诱导 NB4 细胞凋亡，故 抑制 NB4 细胞内 NF-κB 活性可能是 TA 诱导 NB4 细胞凋亡的重要作用机制之一。 关键词： 黄芪总苷；NB4细胞；细胞凋亡；流式细胞术 Mechanism study on the apoptosis of NB4 cells induced by Total Astragalosides Abstract Objective: To investigate the effect of Total Astragalosides(TA) on acute promyelocytic leukemia cell line NB4 cell growth inhibit