慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对大鼠脊髓损伤的修复作用-麻醉学专业毕业论文.docx

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 2 PAGE 2 中文摘要 慢病毒介导 RNA 干扰 Cdh1 的表达对大鼠脊髓 损伤的修复作用 硕士研究生：祁月红 导 师：张传汉 教授 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室 目的： 观察大鼠脊髓损伤后皮层体感运动区 Cdh1 mRNA 的表达变化，探讨慢病 毒介导 RNA 干扰 Cdh1 的表达对脊髓损伤修复的作用。 方法：20 只雄性成年健康 SD 大鼠随机分为正常对照组和手术组（1wk 组、2wk 组）， 手术组采用 Allen 氏法在 T10-T11 建立脊髓打击损伤模型，正常对照组仅咬除 T10 椎板。 1wk、2wk 后分别取大鼠前囟后体感运动皮层区域，然后提取组织总 RNA，采用实时荧 光定量 PCR 检测 Cdh1 mRNA 的表达变化。另 30 只雄性成年 SD 大鼠随机分为生理盐水 注射组（A 组，n=10），空慢病毒注射组（B 组,n=10）和重组慢病毒注射组（C 组, n=10）。 3 组均采用改良 Allen 氏法建立脊髓打击损伤模型，术后 1wk 分别在大鼠前囟后体感 运动皮层区注射生理盐水、空慢病毒和重组慢病毒，注射 10d 后每组取 5 只采用实时 荧光定量 PCR 检测法检测 Cdh1 mRNA 的表达并且在术后不同时间点对大鼠进行运动功 能采用 Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分标准评估，术后第 6wk 用同样的方法在原 皮层区域注射 10%BDA-TR（Biotinylated Dextran Amine - Texas Red）。术后 8wk 处死并用 4%多聚甲醛灌注固定取脊髓损伤区域作冰冻连续纵切片,荧光显微镜下直接 观察。 结果：大鼠脊髓损伤后 1wk 和 2wk 前囟后体感运动皮层区域的 Cdh1 mRNA 的表 达均高于对照组（P0．05）, 注射药物后 C 组 Cdh1 mRNA 的表达低于 A 组及 B 组 （P0．05）。损伤 6wk 后 C 组运动功能评分均高于另两组（P0．05）。C 组在脊髓 空洞区可见大量神经纤维通过，而 A 组和 B 组仅少量通过。 结论：大鼠脊髓损伤后 Cdh1 mRNA 的表达明显升高，通过下调 Cdh1 的表达能 促进轴突的生长，提示 Cdh1 是具有抑制轴突生长的功能。 关键词： 脊髓损伤; 细胞周期末期促进复合物; 慢病毒; RNA 干扰 注：本研究课题为国家自然科学基金资助项目（项目编号。 ABSTRACT Lentivirus-mediated RNA interference inhibits Cdh1 expression in the recovery of spinal cord injury in rats M.D. Candidate : Yuehong Qi Tutor : Prof. Dr. Chuanhan Zhang Department of Anesthesiology, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology AIM: To investigate the expression of Cdh1 in the sensorimotor cortical of rats after spinal cord injury and to study the repairing effect of changing the expression of Cdh1 by lentiviral-mediated RNAi. METHODS: Twenty male Sprague-Dawlcy rats were randomly divided into normal group and operation group which included 2 subgroups (1, 2 weeks). Rats models of spinal cord injury were implemented with Allen method after removing lamina of vertebral and spinous process of T10 and T11．Tl0 laminectomy was performed in the control group．Both groups of rats were killed respectively in lw, 2w. The mRNA of the sensorimotor cortex