高质量果蝇基因组DNA的抽提1实验.docVIP

湖处科鞍摩浣遗传学实验报告 实验名称 SDS法高质量抽提果蝇基因组DNA 实验器材 玻璃棒烧杯高速离心机1.5ml离心管若干枪头水浴槽分析天平移 液枪紫外光分析仪 实验材料 活体果蝇若干只 实验药品 1 mol/L Tris. HCl(pH=7. 6) 1 mol/L Tris. HC1 ( pH二9. 0 ) 0. 5 mol/L EDTA(pH=8. 0) 10% 十二烷基硫酸钠(SDS) 缓冲液 A(100 ml)[含 Tris. HC1 (pH=9. 0) 0. lmol/L、EDTA. 2Na (pH=8. 0) 0. 1 mol/L、 SDS 1%] 8 M醋酸钾(100 ml) Tris平衡酚(pH二8.0)氯仿 TE[含终浓 度 10 Tris. Cl (pH二7. 6), 1 u M EDTA(pH=8. 0) ] 100ml 异丙醇 实验目的 1、 掌握动物基因组DNA抽取的操作过程，了解DNA提取的意义。 2、 熟悉DNA的提取步骤和了解DA定量测定的原理、方法。 实验原理 核酸是重要的生物大分了么一，脱氧核糖核酸(DNA)是核酸的一种，DNA是绝 人多数生物(除少数RNA病毒外)记录、存储、传递遗传信息的分了。近年来， 分子化物学技术迅速发展，在分子遗传学研究领域的诸多方而涉及到抽提基因组 DNA的方法。DNA的提取是进行PCR扩增、Southern杂交、限制性片段长度多态性 分析等实验的基础。 使用消化缓冲液，使DNA从细胞中释放出來，65摄氏度温水浴町加速DNA溶解， 酚.氯仿.杲戊醇抽提对以将蛋白质与DNA分离，冷的界?丙醇沉淀DNA, 70%的乙醇 洗去DNA表而的残留的有机溶剂。 药品配制 一、储存液的配制 1. 1 1 mol/L Tris. HCl(pH=7. 6) 在800 ml水中溶解121. IgTris碱,加入浓盐酸60ml调节pH俏至7. 6,应在 溶液冷却至室温后最后调定pH值，加水定容至1L,分装后高压灭菌。 1 mol/L Tris. HC1 (pH=9.0) 在800 ml水中溶解121. IgTris碱，加入浓盐酸(大约30多ml)调节pH值至 9.0,应在溶液冷却至室温后最后调定pH值，加水定容至1L,分装后高压灭菌。 0.5 mol/L EDTA (pH二0) 在800 ml水中加入186. lg 一水乙一胺一乙酸一钠，在磁力搅拌器上剧烈搅 拌，用NaOH调节pH值至 0 (约需20g NaOH颗粒)，然后定容至1L,分装后高 压灭菌。 10%十二烷基硫酸钠(SDS) 在900ml水中溶解100g电泳级SDS,加热至68°C助溶,加儿滴浓盐酸调节溶 药品配制实验步羽 药品配制 实验步羽 液的pH值至7. 2,加水定容分装备用。无盂灭菌。 二、试剂的配制 1 缓冲液 A(100 ml)[含 Tris. HC1 (pH=9. 0) 0. lmol/L、EDTA. 2Na (pH=8. 0) 0. 1 mol/L、SDS 1%] 按下列比例加入储存液： 1 mo I /L Tris. HC1 (pH 二 9.0)： 10 ml 0. 5 mol/L EDTA(pH二 0): 20 ml 10%十二烷基硫酸钠： 10 ml 加适量的水定容至100 mlo 8 M 醋酸钾(100 ml) 将78. 56g无水醋酸钾溶解于90ml去离子水中,定容至100 mh Tris 平衡酚(pH=8. 0) TE[含终浓度 10pM Tris.Cl(pH=7. 6), 1 P M EDTA(pH=8?0)] 100ml 按下列比例加入储存液： 1 mol/L Tris. HCl(pH=7. 6)： 100u 1 0. 5 moi/L EDTA(pH二 0): 200u 1 加适量的水定容至100 mlo 1、 实验室乙酬已用完，将果蠅培养瓶放入冰箱内冷冻，代替乙讎麻醉，瓶口应 朝下放置，冷冻约5mino 2、 取两支1.5ml离心管，每支离心管装入15只果蝇，再次放入冰箱内，冷冻约 5mino 3、 加入90卩1缓冲液A。 4、 用烧禿的枪头将果蝇充分地捣碎，放回冰箱里。（枪头大小接近与离心管底部 大小，避免捣碎不充分） 5、 取出后,放在超恒温水槽,70°C水浴中温浴30min,每lmin旋转混匀一次, 使离心管内液体受热均匀。 6、 加入15P1醋酸钾，混匀（使离心管慢慢上下倒置，不能震荡混匀）。 7、 放入冰箱冰浴30mino 实验步骤结果与分析 实验步骤 结果与分析 8、 13000rpm 离心 15niino 9、 将上清转移至新的离心管，除去任何沉淀或界而杂质。 10、 加入1倍体积的氯仿（约90P1）,充分混匀（不是振荡）。 11、 13000rpm 离心 5 分钟。 12、