利用条件性敲除小鼠模型对mTOR在肌肉和脂肪发育中的功能研究-动物遗传育种与繁殖专业毕业论文.docxVIP

分类号 分类号 密级 华中农业大学博士学位论文 利用条件性敲除小鼠模型对mTOR在肌肉和脂肪发育 中的功能研究 Function of mTOR in Skleatal Muscle and Adipose Tissue Development Revealed by Conditional Knockout Mice 研究生：张朋朋 学 号：2011302010025 指导教师：邓昌彦教授 郑嵘副教授 专世动物遗传育种与繁殖 研究方向：分子遗传学与动物育种 获得学位名称：农学博士 获得学位时间：2015年6月 华中农业大学动物科技学院 二。一五年六月 万方数据 本研究由“十一五国家科技支撑计划 本研究由 “十一五国家科技支撑计划 (2006BAD01A08．01) National Key Technology RD program in the llth Five Year Plan of China(2006BAD01A08—01) 湖北省重点项目(2013BBA057) Hubei Province Key Project of Science and Technology (2013BBA057) 国家留学基金(201206760022) China Scholarship Council(201206760022) 共同资助 万方数据 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 厄 如需保密，解密时间 年 月 日 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明。并表示了谢意。 研究生始张M A Ji 帆彤年∥月乃日 学位论文使用授权书 御 编≯舰M 名嘶髟霄 签名日期：彬年易月／口日 签名日期： 7口铲 ‘月，o／日 f 万方数据 利用条件性敲除小鼠模型对mTOR在小鼠肌肉和脂肪发育中的功能研究目 利用条件性敲除小鼠模型对mTOR在小鼠肌肉和脂肪发育中的功能研究 目 录 摘要 ．．i ABSTRACT ．iv 缩略词表 vii 第一章文献综述 1 l前言 ．1 2肌肉生长发育的研究进展 ．1 2．1肌肉生长发育的过程 一1 2．2肌肉干细胞 ．．2 2．3肌肉损伤修复与再生 ～3 2．4肌肉损伤修复的调控 一4 3脂肪生长发育研究进展 ．6 3．1脂肪的分类 一6 3．2脂肪干细胞的来源 一7 3．3脂肪的生长与发育调控 ．．7 4 mTOR信号通路研究进展 lO 4．1 mTOR信号通路及其功能 ．10 4．2 mTOR对肌肉发育和再生的调控 ．1l 4．3 mTOR对脂肪生长发育的调控 ．12 5 Cre—LoxP系统及其构建基因敲除动物的研究进展 13 5．1 Cre—LoxP系统的研究进展 ．13 5．2骨骼肌特异性敲除小鼠模型的研究进展 14 5．3脂肪组织特异性敲除小鼠模型的研究进展 15 6研究目的与意义 15 第二章利用骨骼肌卫星细胞特异性敲除小鼠研究mTOR在肌肉再生和肌肉干细胞 中的功能 17 l试验材料 17 万方数据 华中农业大学2015届博士研究生学位(毕业)论文1．1试验动物 华中农业大学2015届博士研究生学位(毕业)论文 1．1试验动物 ．17 1．2主要仪器和设备 ．17 2试验方法 18 2．1苏木素一伊红染色(Hematoxylin and eosin staining，HE staining) 18 2．1．1试剂配制 ．．18 2．1．2染色步骤 ．．18 2．2骨骼肌卫星细胞的分离培养 ．19 2．2．1试剂配制 ．．19 2．2．2骨骼肌卫星细胞分离培养 ．．19 2．2．3骨骼肌卫星细胞的分化 ．．20 2．3小鼠基因分型 ．20 2．3．1试剂配制 ．．20 2．3．2试验步骤 ．．20 2．4蛋白质提取与Western blot 21 2．4．1试剂配制 ．．2 1 2．4．2试验步骤 ．．23 2．5 mRNA提取与定量PCR ．23 2．6肌肉损伤和再生检测 ．24 2．7 Tamoxifen诱导基因敲除 24 2．8 Evansblue染色 ．24 2．9免疫荧光染色 ．24 2．9．1试剂配制 一24 2．9．2染色步骤 ．．25 2．10单根肌纤维分离培养 25 2．10．1试剂配制 25 2．10．2单根肌纤维分离培养 25 3结果与分析 26 3．1骨骼肌卫星细胞特异性