利用诱导多能干细胞研究丙戊酸诱发Alpers-Huttenlocher综合征肝毒性的机理-细胞生物学专业毕业论文.docxVIP

中国科学技术大学博士学位论文 中国科学技术大学 博士学位论文 利用诱导多能干细胞研究丙戊酸 诱发A l pers-Hutten I ocher综合 征肝毒性的机理 作者姓名： 李胜彪 学科专业： 细胞生物学 导师姓名： 裴端卿研究员 刘兴国研究员 完成时间： 二O一五年三月三十日 —确秽拶彳 万方数据 唧煳㈣㈣㈣Y2806彳：；j『。萝 唧煳㈣㈣㈣ Y2806彳：；j『。萝 University ofof Sciencecience and‘Technologyechnolo ofof ’．qy d issertation for doctor S deg ree I nvestigation of Val proic Acid—induced HepatOtOxiCity jn Alpers Syndrome using an iPSC Disease Model Author’S Name： Shengbiao Li speciality： Cell Biology Supervisor：PI．Duanqing Pei PI．Xingguo Liu Finished time： March 30m，201 5 万方数据 中国科学技术大学学位论文原创性声明 中国科学技术大学学位论文原创性声明 本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成 果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写 过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了明确 的说明。 作者签名： 签字日期： 卫f!：9一 中国科学技术大学学位论文授权使用声明 作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥 有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构送交 论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入《中国学 位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和 纸竺i黼吨。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 支Ⅳ训溜 厶开 口保密( 年) 作者签名： 妞触 导师签名黟 签字日期： —趾啤 签字日期： 型孥 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 丙戊酸钠(VPA)是目前在世界范围内使用最广泛的一线抗惊厥药物和定期 用于偏头痛治疗、双相性精神障碍和慢性头痛的治疗药物，并且经常也会拿来作 为辅助的化疗，但是VPA的使用会造成严重肝损伤的副作用。Alpers综合征 (AHS)，是一种由于线粒体DNA聚合酶POLG基因突变造成的遗传性线粒体 遗传性疾病。Alpers综合征最显著的一个肝病特征是对于在幼儿时期发生的VPA 诱导的肝毒性具有很高的风险。然而，这种高风险的肝毒性发生的机制是什么一 直还不清楚，因此本文试图利用体外分化建立的疾病模型来探索其中的原因。在 本研究中，我们将两例AHS病人的成纤维细胞诱导成为病人特异性的诱导多能 性细胞，然后在用无血清体系下将它们的多能干细胞分化成病人来源特异性肝细 胞(AHS iPSCs．Hep)。两个病人的分化的肝细胞与正常的对照细胞相比，都对 VPA诱导的肝毒性非常敏感，产生凋亡。并且，细胞凋亡是依赖线粒体途径的， 因为凋亡蛋白caspase一9和caspase．3都被激活，而且细胞色素c也被释放出来。 与此同时，值得注意的是，AHS病人肝细胞中线粒体内保持线粒体嵴紧密和保 护细胞色素c不被释放出来的OPAl复合物的量也比正常对照的要少。进一步研 究发现，AHS病人肝细胞的线粒体DNA聚合酶POLG的表达量和线粒体DNA 的含量比正常对照细胞的都要少，而且，AHS病人肝细胞ATP的产生能力也较 正常对照的要弱。AHS iPSCs分化得到肝细胞AHS iPSCs．Hep其线粒体的结构 也不正常，嵴变得少儿膨大，甚至有些线粒体缺少嵴。在研究VPA诱导AHS iPSCs．Hep凋亡敏感性机制时，我们发现，一种由于线粒体超氧化物的量瞬时增 加而产生的超氧炫，其产生的频率比正常对照细胞要高，而这种超氧炫的产生本 质上是由线粒体通透性转换孔(mPTP)的开放引起的。同时，当我们加入mPTP 抑制剂时，AHS iPSCs．Hep对于V1)A诱导的肝毒性的敏感性下降到正常对照的 水平。本研究的这些结果说明如果把线粒体mPTP作为药物靶点设计药物，很有 可能会防止AHS病人对于VPA诱导的肝毒性的发生。此外，曾报道过用于治疗 VPA诱导的肝毒性的药物乙酰胆碱camitine和N．acetylcysteine(NAC)，在本研 究的疾病模型中同样可以降低AHS病人对VPA诱导的肝毒性的敏感性。总之通 过AHS病人成纤维细胞来源的iPSCs建