三氧化二砷免疫毫微球靶向治疗膀胱肿瘤的研究-外科学(泌尿外科)专业论文.docx

兰!型垫奎兰旦塑堕兰堕 兰!型垫奎兰旦塑堕兰堕 !!塑塑苎主兰垡堡壅 中英文缩写词对照 缩略词 英文全称 中文全称 Asz03 ArseniC triOXj de 三氧化二砷 As：0,-NS ArseniC trioxide—loaded albumin 三氧化二砷蛋白微球 nanosphere As：0。一(BSA—NS) ArseniC triOXide—loaded albumin BDI一1导向三氧化二砷 一BDI—l immuno—nanosphere 免疫蛋白微球 BSA Boyine serum albumin 牛血清白蛋白 Counts per mi nute 每分钟记数 DF Desirablity funtion 优化指数 DL Drug 1 oading 载药量 DTE Drug trapping effiCiency 包封率 DTT Dithiothreitol 二巯基苏糖醇 FITC Fhorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 HEPES Hydroxyethyl piperazine ethanesu] 羟乙基哌嗪乙磺酸 一foniC acid 。H-TDR Tritiated thymidine 3氢一胸腺嘧啶核苷 Mcab Monoc 1 onal Ant ibody 单克隆抗体 2一ME 2一mercaptoethan01 2一巯基乙醇 OD Optieal densi ty 光密度 PBS Phosphate buffered sal i 磷酸盐缓冲液 PEG Polyethylene glycol 聚乙二醇 PI Propidium iodide 碘化丙锭 rpm Revolutions per minute 转数／每分钟 SDS Sodium dodeeyl sulfate—p01ya 十二烷基硫酸钠一聚丙 crylamide gel electrophoresiS 烯酰胺凝胶电泳 SPDP N—Succihimidyl一3一(2Pyridithi0) N一琥珀酰亚胺基一3一(2 Propionate 一吡啶基二硫)丙酸脂 TEMED Tetramethylethylethylenediami 四甲基乙二铵 TriS Tromethamine 三羟甲基氨基甲烷 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 2002级博士学位论文 三氧化二砷免疫毫微球靶向治疗膀胱肿瘤的研究 摘 要 【目的l 制备单抗BDI—l导向的三氧化二砷免疫蛋白微球[As。O。一(BSA—NS) 一BDI—i]并验证其对膀胱肿瘤细胞的特异性结合和杀伤作用，以最大程度减轻 As：0。毒副作用，实现其导向化疗。 【方法】 I、通过交联固化的方法制备三氧化im白蛋白微球(As203一BSA—NS) 按『F交设计优化制备工艺。电镜观察、原子荧光分析的方法评价微球质量，体外 释药方法研究其释药特性。2、采用杂交瘤细胞BDI一1腹腔种植的方法制备单克 隆抗体BDI一1并采用亲和层析的方法纯化抗体。免疫荧光的方法鉴定抗体活性并 测量其效价。通过N一羟基琥珀酰亚胺基一3一(2-吡啶基二硫)一丙酸脂(SPDP)交 联的方法制备蛋白免疫微球，还原电泳、光镜和电镜的方法鉴定As。0，免疫微球 的共价连接与活性，吖啶橙染色检测肿瘤细胞凋亡。3、。氢一胸腺嘧啶核苷(3H—TDR) 掺入法检测As：O。～(BSA—NS)一BDI—l的细胞杀伤活性，流式细胞计数法测定细胞摄 亡。4、通过BIU一87细胞种植的方法建立裸鼠膀胱肿瘤的原位模型，经尿道置套 管针膀胱灌注给药。观察小鼠一般情况并记录生存时间，解剖显微镜和膀胱肿瘤 石蜡切片染色观察膀胱肿瘤生长和浸润情况及各器官毒性反应。原位末端转移酶 标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡情况。 【结果】 l、确定As，0，～BSA—NS制备工艺的最佳组合为A4B。C。D。，其DF值为 0．76534。电镜观察进一步证实制备的As，0。一NS形状规则、大小合适，体外释药 实验证实As。0。蛋白微球释药速度明显慢于单纯的As。0。。2、所制备抗体纯度较高 其效价达1：20，000，紫外分光光度计分析抗体浓度达5mg／ml，SDS—PAGE还原电 泳可见免疫微球被还原后在远端形成两条蛋白条带。光镜下可见蛋白免疫微球在 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 2002级博士学位论文 肿瘤细胞周围并随细胞移动。电镜下可见蛋白微球与肿瘤细胞紧密连接且形态完 整。吖啶橙染色可见免疫微球处理的膀胱肿瘤细胞表现出凋亡特征。3、 Asz0，一(BSA—NS)一BDI一1杀伤膀胱肿瘤细胞的效果明显好于As。仉一BSA—NS和As：0。 (P0．05)。Annexin